| 人ODC基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 迟伟玲,刘贤锡,宋现让,李文通. 人ODC基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定[J]. 山东大学学报(医学版), 2005, 43(3): 199-202,207 |
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| 作者姓名： | 迟伟玲 刘贤锡 宋现让 李文通 |
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| 作者单位： | 山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所,山东,济南,250012;山东省千佛山医院检验科,山东,济南,250014;山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所,山东,济南,250012;山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所,山东,济南,250012;山东省肿瘤医院基础研究中心,山东,济南,250117;山东大学医学院病理学教研室,山东,济南,250012 |
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| 基金项目： | 山东省科技计划项目(No.032050111)。 |
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| 摘 要： | 目的:构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的RNAi慢病毒载体。方法:根据ODC mRNA序列, 选择3个19nts的靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补DNA链,退火后插入pSuper载体的H1RNA启动子后产生pRiODC,将其中的ODC shRNA表达结构酶切插入慢病毒转移质粒pHR' CMVGFP,产生pHRiODC/GFP。与△R8.2和pCMVVSVG共转染HEK293T细胞,包装产生慢病毒,分别采用转导HEK293T细胞和Real-Time RT-PCR的方法测定慢病毒的功能滴度和病毒RNA分子拷贝数。结果:酶切和测序证实,pRiODC质粒构建正确,产生能同时表达GFP和转录产生ODC shRNA的慢病毒转移质粒PHRiODC/GFP,未浓缩及浓缩病毒悬液的功能滴度分别为6.3×104 TU/ml和7×106TU/ml, RNA拷贝数分别为3.4×108copies/ml和3.6×1010copies/ml。结论:成功构建人ODC基因RNAi慢病毒载体,为通过阻断ODC基因表达治疗恶性肿瘤奠定了基础。
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| 关 键 词： | 鸟氨酸脱羧酶 基因疗法 逆转录病毒 RNA干扰 |
| 文章编号： | 1671-7554(2005)03-0199-04 |
Construction and identification of the lentiviral RNA interference vector of human ornithine decarboxylase gene |
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| CHI Wei-ling,LIU Xian-xi,SONG Xian-rang,LI Wen-tong. Construction and identification of the lentiviral RNA interference vector of human ornithine decarboxylase gene[J]. Journal of Shandong University:Health Sciences, 2005, 43(3): 199-202,207 |
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| Authors: | CHI Wei-ling LIU Xian-xi SONG Xian-rang LI Wen-tong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Ornithine decarboxylase Gene therapy Retroviruses RNA interference |
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