| 人瘦素蛋白在大肠杆菌中的融合表达和纯化 |
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| 引用本文： | 李文娟,陈伟,朱任之,付小兵.人瘦素蛋白在大肠杆菌中的融合表达和纯化[J].中华实验外科杂志,2006,23(3):336-338. |
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| 作者姓名： | 李文娟 陈伟 朱任之 付小兵 |
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| 作者单位： | 1. 100037,北京,解放军总医院304临床部全军创伤修复重点实验室
2. 兰州大学基础医学院病理教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30400172）;国家973计划资助项目（2005CB522603）;国家杰出青年科学基金资助项目（39525024） |
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| 摘 要： | 目的构建人瘦素因子（Leptin）的原核表达质粒pGEX-4T-3-LEP，并诱导该基因在原核细胞中大量表达。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和DNA重组技术，从人皮肤成纤维细胞内将编码人Leptin的cDNA序列克隆至原核表达载体pGEX-4T-3上，选取阳性克隆扩增后，提取DNA进行酶切鉴定和测序。同时应用SDS-PAGE和蛋白质印迹方法对其表达产物进行特异性鉴定。结果克隆出的Leptin基因的cDNA由469bp组成，包括翻译起始密码子、编码序列和终止密码子等部分，含有Letinp基因的cDNA的表达质粒pGEX-4T-3在DH5a细菌体内能够表达，并且随着诱导时间的延长，Leptin基因的表达量增加，重组Leptin蛋白主要存在于包涵体中。结论Leptin基因可以在原核细胞中获得表达，为深入研究该蛋白在创伤愈合中的具体作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | Leptin基因 原核表达载体 克隆 |
| 收稿时间： | 2005-11-22 |
| 修稿时间： | 2005年11月22 |
Fusion expression and purity of human leptin in E. coli |
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| LI Wen-juan , CHEN Wei, ZHU Ren- zhi,et al..Fusion expression and purity of human leptin in E. coli[J].Chinese Journal of Experimental Surgery,2006,23(3):336-338. |
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| Authors: | LI Wen-juan CHEN Wei ZHU Ren- zhi |
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| Institution: | Key Research Laboratory of Wound Repair, 304th Clinical Department of General Hospital of PLA, Beijing 100037, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Leptin gene Prokaryotic expression vector Clone |
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