| 周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因原核和真核表达质粒的构建 |
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| 引用本文： | 方政,黄为群,陈阳,谢东方,姜声扬,吴建军. 周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因原核和真核表达质粒的构建[J]. 中国地方病学杂志, 2007, 26(6): 639-642 |
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| 作者姓名： | 方政 黄为群 陈阳 谢东方 姜声扬 吴建军 |
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| 作者单位： | 南通大学医学院寄生虫学教研室,226001 |
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| 基金项目： | 江苏省教育厅自然科学研究计划项目（04KJD310136） |
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| 摘 要： | 目的构建我国流行的周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶（BmCP）基因原核和真核表达质粒，为进一步研究奠定基础。方法从周期型马来丝虫虫体中提取总RNA，反转录成cDNA，设计合成引物，以eDNA为模板，通过PCR从eDNA中扩增出目的基因，扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pMD18-T载体，进行双酶切及PCR扩增鉴定，获得阳性重组质粒，进行测序分析和同源性比较。阳性克隆的质粒亚克隆至真核表达质粒peDNA3．1（＋），转化感受态大肠埃希菌（E-coli）DH5α，筛选阳性克隆，用PCR和双酶切鉴定阳性重组子。结果RT—PCR扩增出1条约1201bp的特异性条带，重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符．DNA序列分析与GenBank已知的基因序列同源性为99％。构建了真核重组表达质粒peDNA3．1-BmCP。结论成功构建了周期型BmCP原核和真核重组表达质粒，为进一步研究该基因的功能提供了条件。
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| 关 键 词： | 马来丝虫 半胱氨酸蛋白酶 基因 原核表达 真核表达 质粒 |
| 收稿时间： | 2006-11-02 |
Construction of prokaryotic and eukaryotic expression plasmids with cysteine protease gene from periodic Brugia malayi |
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| FANG Zheng,HUANG Wei-qun,CHEN Yang,XIE Dong-fang,JIANG Sheng-yang,WU Jian-jun. Construction of prokaryotic and eukaryotic expression plasmids with cysteine protease gene from periodic Brugia malayi[J]. Chinese Jouranl of Endemiology, 2007, 26(6): 639-642 |
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| Authors: | FANG Zheng HUANG Wei-qun CHEN Yang XIE Dong-fang JIANG Sheng-yang WU Jian-jun |
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| Keywords: | Brugia malayi Cysteine protease Genes Plasmids Construction |
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