hERβ全长基因真核表达载体pEGFP-C1-hERβ的构建及其在PC-3M细胞中的表达

目的：构建人雌激素受体β（hERβ）全长基因的真核表达载体pEGFP-C1-hERβ，并转染激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M。方法：采用RT-PCR法从卵巢囊肿患者切除的部分正常卵巢组织中钓取hERβ全长基因（1 593 bp），与pMD18-T载体连接做全自动序列测定。将测序正确的克隆质粒pMD18-T-hERβ和表达载体pEGFP-C1分别用Hind Ⅲ和BamHⅠ进行双酶切，应用基因重组技术构建hERβ全长基因真核表达载体pEGFP-C1-hERβ。质粒经Hind Ⅲ和BamHⅠ双酶切和PCR电泳鉴定后，采用脂质体转染法转染PC-3M细胞。结果：重组质粒经限制性酶切鉴定得到与hERβ全长基因长度一致（1 612 bp）的酶切产物；测序分析证实，PCR产物与GenBank上登录的hERβ基因（NM_001437）序列完全一致，表明成功地完成了hERβ的扩增和表达载体的构建；荧光显微镜下可见转染的PC-3M细胞有绿色荧光蛋白的表达；PCR测定分析，转染细胞hERβ的表达增加。结论：构建完成真核表达载体pEGFP-C1-hERβ，hERβ基因在PC-3M细胞内成功表达。