| 突变敏感性分子开关检测线粒体DNA A1555G位点的条件优化 |
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| 引用本文： | 龚咏晴,董巍檑,陈方方,彭华,周晶,郭紫芬.突变敏感性分子开关检测线粒体DNA A1555G位点的条件优化[J].临床检验杂志,2016(3):161-164. |
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| 作者姓名： | 龚咏晴 董巍檑 陈方方 彭华 周晶 郭紫芬 |
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| 作者单位： | 南华大学药物药理研究所，湖南衡阳 421001,南华大学附属第一医院妇产科，湖南衡阳 421001,南华大学药物药理研究所，湖南衡阳 421001,南华大学药物药理研究所，湖南衡阳 421001,南华大学药物药理研究所，湖南衡阳 421001,南华大学药物药理研究所，湖南衡阳 421001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（81102516）；衡阳市科技局项目（2012KJ69）。 |
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| 摘 要： | 目的对高保真酶介导的突变敏感性分子开关技术检测线粒体DNA(mt DNA)A1555G位点条件进行优化。方法利用3'硫代磷酸化修饰的突变型引物和野生型引物作为下游引物,在其上游设计一条公共引物分别构成突变引物对和野生引物对,以构建好的包含mt DNA A1555G位点的突变型质粒和野生型质粒为模板,进行高保真聚合酶介导的双向引物延伸反应,对PCR体系中的退火温度、引物浓度、模板浓度等条件优化,通过凝胶成像系统对其PCR结果进行分析确定最佳反应条件。结果分子开关技术检测mt DNA A1555G位点的最佳PCR条件:退火温度为61.0℃,引物浓度为0.6μmol/L,检测模板浓度为103~106copies/μL。结论确定了分子开关技术检测mt DNA A1555G位点的最佳反应条件,为该技术在线粒体DNA的突变筛查中的应用提供依据。
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| 关 键 词： | 突变敏感性分子开关 氨基糖苷类耳聋 线粒体DNA 高保真聚合酶 |
| 收稿时间： | 2/1/2016 12:00:00 AM |
Investigations on the optimized conditions of mitochondrial DNA A1555G mutation detected by mutation sensitive molecular switch technique |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mutation sensitive molecular switch aminoglycoside antibiotic-induced deafness mitochondrial DNA high fidelity polymerase |
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