| 小鼠雌激素受体α基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 胡晓,万兴,娄磊,王建怡.小鼠雌激素受体α基因重组腺病毒载体的构建及鉴定[J].第四军医大学学报,2009(23):2773-2777. |
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| 作者姓名： | 胡晓 万兴 娄磊 王建怡 |
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| 作者单位： | 贵州省人民医院神经内科; |
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| 基金项目： | 贵州省科技厅立项基金[黔基合计字(2009)3042] |
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| 摘 要： | 目的：构建C57BL/6小鼠雌激素受体α（Esr1）重组腺病毒表达载体,扩增并纯化重组腺病毒颗粒.方法：采用RT-PCR方法从C57BL/6小鼠卵巢细胞扩增目的Esr1 CDS区基因片段,至pMD19-TSimple载体后测序鉴定.亚克隆Esr1CDS区基因片段至腺病毒穿梭质粒pDNR-CMV,再与骨架质粒pLP-Adeno-X-CMV在感受态大肠杆菌ElectroMAXTMDH10BTMCells中进行同源重组获得腺病毒载体质粒Adeno-Esr1,PacI酶切线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,测定感染性滴度,获得重组腺病毒Ad-Esr1.将病毒感染HEK293细胞,Western Blot检测Esr1蛋白表达.结果：测序证实提取的Esr1 CDS区基因序列完全正确;测序及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;感染性滴度为6.4×1013（pfu/L）,Western Blot检测Ad-Esr1感染的HEK293细胞能表达Esr1蛋白,而未感染的HEK293细胞蛋白不表达.结论：成功构建了C57BL/6小鼠Esr1基因重组腺病毒载体,为进一步研究Esr1在神经系统中生物学功能及对神经系统疾病的基因治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 雌激素受体α 腺病毒载体 基因治疗 |
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