| 人H-Ras12V突变蛋白表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 胡昳旸,梁亮,尹郸丹,刘强,韩骅. 人H-Ras12V突变蛋白表达载体的构建及表达[J]. 医学争鸣, 2009, 0(24) |
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| 作者姓名： | 胡昳旸 梁亮 尹郸丹 刘强 韩骅 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室;第四军医大学唐都医院血液科; |
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| 基金项目： | 科技部“973”计划项目(2009CB521706) |
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| 摘 要： | 目的:构建研究H-Ras12V突变蛋白的表达载体,并在体外进行表达和检测.方法:从细胞中分离提取RNA,通过RT-PCR扩增获得人的正常H-RascDNA,测序鉴定.通过PCR介导的定向突变的方法,在其第12位氨基酸处引入一个错义突变G→V,连入测序载体进行鉴定.应用DNA重组技术,将获得的H-Ras12VcDNA插入真核表达载体pEGFP-C2,使用限制性酶切反应鉴定.通过脂质体将重组质粒转染入Hela细胞,使用Western Blot对其融合蛋白进行检测.结果:经过XhoI和BamHI的双酶切以及测序鉴定证实成功构建了pEGFP-H-Ras12V融合蛋白表达载体,克隆基因与GenBank登陆结果一致并成功实现其第12位氨基酸G→V的突变.WesternBlot证实融合蛋白特异性表达,并在转染的细胞系中观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:成功构建了pEG-FP-H-Ras12V融合蛋白的表达载体,并在体外鉴定EGFP-H-Ras12V融合蛋白的表达.
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| 关 键 词： | H-Ras12V克隆 表达载体 融合蛋白 |
Construction and expression of human H-Ras12V fusion protein expression vector |
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| HU Yi-Yang,LIANG Liang,YIN Dan-Dan,LIU Qiang,HAN Hua. Construction and expression of human H-Ras12V fusion protein expression vector[J]. Negative, 2009, 0(24) |
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| Authors: | HU Yi-Yang LIANG Liang YIN Dan-Dan LIU Qiang HAN Hua |
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| Affiliation: | HU Yi-Yang1,LIANG Liang1,YIN Dan-Dan2,LIU Qiang2,HAN Hua1 1Department of Medical Genetics and Developmental Biology,School of Basic Medicine,Xi'an 710033,China,2Department of Hematology,Tangdu Hospital,Fourth Military Medical University,Xi'an 710038 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | H-Ras12V expression vector fusion protein |
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