重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α转染大鼠内皮祖细胞 |
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引用本文: | 李巧,王志刚,冉海涛,钟世根,任建丽,李兴升,凌智瑜.重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α转染大鼠内皮祖细胞[J].第四军医大学学报,2009,30(22):2507-2510. |
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作者姓名: | 李巧 王志刚 冉海涛 钟世根 任建丽 李兴升 凌智瑜 |
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作者单位: | 重庆医科大学超声影像学研究所,重庆,400010;重庆医科大学超声影像学研究所,重庆,400010;重庆医科大学超声影像学研究所,重庆,400010;重庆医科大学超声影像学研究所,重庆,400010;重庆医科大学超声影像学研究所,重庆,400010;重庆医科大学超声影像学研究所,重庆,400010;重庆医科大学超声影像学研究所,重庆,400010 |
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基金项目: | 国家自然科学基金面上项目(30800271;30700166) |
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摘 要: | 目的:研究含缺氧诱导因子(HIF-1α)及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组腺病毒(Ad-EGFP/HIF-1α)感染大鼠内皮祖细胞(EPCs)的可行性.方法:采用percoll密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓单个核细胞,VEGF,bFGF,EGF诱导培养,观察其形态学变化,免疫细胞化学染色鉴定其表面抗原.Ad-EGFP/HIF-1α在HNK293细胞中进行扩增,之后转染体外培养的EPCs,分别于24,48,72,96h采用倒置荧光显微镜下观察细胞表达绿色荧光蛋白(GFP)情况.MTT检测细胞生长活性;流式细胞术检测转染率并用RT-PCR法测定HIF-1α在EPCs中的表达.结果:倒置荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光,随着时间的延长,绿色荧光逐渐增多.MTT法检测细胞在24,48,72,96h的存活率分别为99.83%,99.70%,99.32%,99.57%;流式细胞仪计数随时间的延长,转染率逐渐升高,24,48,72,96h的转染率分别为23.05%,45.94%,78.91%,85.64%.RT-PCR可检测到被感染细胞HIF-1α的表达.结论:重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α能够有效地感染EPCs,转染后在mRNA水平可检测到EPCs中有HIF-1α的表达,并对EPCs活性无明显影响,为进一步研究转基因的EPCs移植促血管新生奠定基础.
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关 键 词: | 内皮祖细胞 重组腺病毒 缺氧诱导因子 |
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