体外构建人羊膜间充质干细胞膜片及成骨分化潜能

文题释义：细胞膜片技术：该技术避免了蛋白酶的消化和外源性支架材料的应用，通过细胞外基质分泌形成膜片组织，然后将膜片用于修复组织缺损和改善器官功能。该技术保留了大量自体细胞分泌的细胞外基质，为细胞的增殖和分化提供与体内极度相似的微环境，目前该技术已经用于临床眼角膜和食管损伤的修复。人羊膜间充质干细胞：取自于废弃的胎盘，贴壁生长，具有低免疫原性和生长周期短等特点，不仅具有成体间充质干细胞的特性还具有部分胚胎间充质干细胞的特性。 摘要背景：人羊膜间充质干细胞属于成体干细胞，其来自于废弃的胎盘，来源广泛，可以无创获取，具有免疫原性低、生长周期短等特点，是组织工程种子细胞的重要来源，目前人羊膜间充质干细胞已经用于临床糖尿病的治疗。目的：探索一种简便的方法构建人羊膜间充质干细胞膜片，并研究其成骨分化潜能。方法：将第3代人羊膜间充质干细胞高密度接种于普通培养皿中，加入成膜片诱导培养基以构建人羊膜间充质干细胞膜片，通过组织学染色以及扫描电镜观察细胞膜片的特性。取第3代人羊膜间充质干细胞高密度接种于培养皿中，加入成膜片诱导培养基培养7 d，再换用成骨诱导培养基培养14 d以构建成骨诱导的人羊膜间充质干细胞膜片。通过茜素红染色、免疫组化染色、碱性磷酸酶活性、RT-PCR以及Western blot检测人羊膜间充质干细胞膜片的成骨分化潜能。结果与结论：①苏木精-伊红染色可见人羊膜间充质干细胞膜片由多层细胞累积而成，细胞分布均匀；②扫描电镜观察可见人羊膜间充质干细胞膜片呈复层结构，胞外有大量的胞外基质产生，细胞包埋于胞外基质中；③人羊膜间充质干细胞膜片成骨诱导14 d，茜素红染色后可见橘红色沉淀，免疫组化染色后细胞周围有大量Ⅰ型胶原产生；④与未诱导的人羊膜间充质干细胞膜片相比，成骨诱导14 d后人羊膜间充质干细胞膜片碱性磷酸酶活性显著升高(P < 0.01)，Ⅰ型胶原、骨钙蛋白、Runt相关转录子2的mRNA和蛋白表达量显著升高(P < 0.05)；⑤该实验应用一种简便、经济的方法在普通培养皿上成功构建了人羊膜间充质干细胞膜片，体外研究证实人羊膜间充质干细胞膜片具有良好的成骨分化潜能。ORCID: 0000-0003-2163-3897(邹刚)中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

In vitro construction of human amniotic mesenchymal stem cell sheet and its osteogenic differentiation