PinX1基因的真核表达载体构建及其在乳腺癌细胞中的表达

目的进一步研究端粒结合蛋白PinX1基因在乳腺癌细胞中对端粒酶活性的调控作用,构建PinX1基因的真核表达载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,表达并鉴定其编码蛋白PinX1。方法采用RT-PCR法扩增PinX1基因的编码序列,将其克隆至pM D18-T载体中构建T-PinX1质粒,NOT1和Xhol1双酶切T-PinX1质粒与PUB6/V5-HIS A载体后,连接并构建真核表达载体PUB6/V5-HIS A-PinX1,采用序列分析鉴定阳性质粒转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用Western blot鉴定PinX1蛋白的表达。结果经酶切、序列分析鉴定证实成功构建PinX1基因的真核表达载体;Western blot检测结果证实,成功完成了该表达载体在乳腺癌MDA-MB-231细胞内的特性外源性表达。结论本研究成功构建了PinX1基因的真核表达载体,并完成了该表达载体在乳腺癌MDAMB-231细胞内的特性外源性表达。为后期进一步研究PinX1基因在乳腺癌发生发展中的作用及PinX1蛋白表达与乳腺癌预后的关系奠定了基础。