| 人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化 |
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| 引用本文： | 车媛媛,许淑芬,方艳秋,段秀梅,史宏博,刘晓林,刘力华,候巍,谭岩. 人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化[J]. 吉林大学学报(医学版), 2007, 33(2): 369-372. DOI: 吉林省科技厅社会发展计划项目资助课题（20 |
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| 作者姓名： | 车媛媛 许淑芬 方艳秋 段秀梅 史宏博 刘晓林 刘力华 候巍 谭岩 |
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| 作者单位： | 1.吉林大学第一医院中心实验室，吉林 长春 130021；2.解放军第461医院检验科，吉林 长春 130021 |
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| 基金项目： | 吉林省科技厅社会发展基金 , 吉林省科技厅科研项目 , 吉林大学校科研和教改项目 , 吉林省杰出青年科学基金 |
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| 摘 要： | 目的：构建人肌红蛋白（Mb）原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白pQE。方法：根据已报道的人Mb基因序列,采用RT-PCR技术从人骨骼肌组织中获得肌红蛋白cDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,得重组质粒，经酶切、PCR及测序鉴定正确后，将酶切目的片段插入原核表达载体pQpQEE30中并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有6个组氨酸的融合蛋白。经镍固定金属亲和层析纯化。结果：序列分析表明，人Mb基因成熟肽编码区含有465 bp,编码153个氨基酸;与GenBank(NM203378) 中已报道的Mb核苷酸序列有98.50 %同源性。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE 电泳和免疫印迹分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的31%,相对分子质量约为16 700，并与商品化的人Mb单抗呈特异性反应。经Ni2+-NTA agarose 纯化获得SDS-PAGE 电泳下单一条带。结论：在大肠杆菌中获得了人Mb的高效表达。
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| 关 键 词： | 基因表达 大肠杆菌 |
| 文章编号： | 1671-587X(2007)02-0369-04 |
| 收稿时间： | 2006-05-15 |
| 修稿时间： | 2006-05-15 |
Cloning, expression and purification of human myoglobin in E. coli |
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| Abstract: | |
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