| 表达大鼠Cdh1基因的重组慢病毒载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 邱瑾,姚文龙,钱巍,张传汉.表达大鼠Cdh1基因的重组慢病毒载体的构建及鉴定[J].国际麻醉学与复苏杂志,2012,33(3). |
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| 作者姓名： | 邱瑾 姚文龙 钱巍 张传汉 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科,武汉,430030 |
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| 摘 要： | 目的 构建表达大鼠Cdh1基因的重组慢病毒载体.方法 根据大鼠Cdh1基因的核苷酸序列,合成目的基因片段并亚克隆到慢病毒表达载体pGC-FU的Age I酶切位点间,命名为pGC-FU-Cdh1.对pGC-FU-Cdh1进行PCR扩增及测序鉴定.将293T细胞按完全随机法分为实验组(每组3只)及对照组(每组3只),分别将pGC-FU-Cdh1及空质粒pGC-FU以脂质体法转染至293T细胞,倒置荧光显微镜观察后,Western blot法检测Cdh1-GFP的表达情况,慢病毒载体LV-Cdh1的包装浓缩及滴度测定. 结果 重组慢病毒表达载体pGC-FU-Cdh1经PCR扩增鉴定及测序鉴定均显示有特异性基因片断,证明大鼠Cdh1基因正向插入慢病毒表达载体pGC-FU中；转染293T细胞后,Western blot法检测到实验组有外源性融合蛋白Cdh1 -GFP的表达(每组3只),对照组无Cdh1-GFP的表达(n=0)(P=0.014)；慢病毒载体LV-Cdh1包装浓缩后,Reahime PCR法测定滴度为2E+8 TU/ml. 结论 成功构建表达大鼠Cdh1基因的重组质粒pGC-FU-Cdh1,并包装为慢病毒,为进一步研究Cdh1功能及基因治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 细胞周期蛋白 APC-Cdh1 慢病毒 转基因技术 |
Construction and identification of recombinant lentivirus vector of rat Cdh1 gene |
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| QIU Jin
,
YAO Wen-long
,
QIAN Wei
,
ZHANG Chuan-han.Construction and identification of recombinant lentivirus vector of rat Cdh1 gene[J].international journal of anesthesiology and resuscitation,2012,33(3). |
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| Authors: | QIU Jin YAO Wen-long QIAN Wei ZHANG Chuan-han |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cell cycle proteins APC-Cdh1 Lentivirus Gene transfer techniques |
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