| 人全长PLCγ1基因真核表达载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 李秀梅,邓凡,曾位森,华亮,陆地,李明,王宏,刘忠英,罗深秋.人全长PLCγ1基因真核表达载体的构建及鉴定[J].南方医科大学学报,2004,24(8):849-853. |
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| 作者姓名： | 李秀梅 邓凡 曾位森 华亮 陆地 李明 王宏 刘忠英 罗深秋 |
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| 作者单位： | 第一军医大学细胞生物学教研室,广东,广州,510515;第一军医大学细胞生物学教研室,广东,广州,510515;第一军医大学细胞生物学教研室,广东,广州,510515;第一军医大学细胞生物学教研室,广东,广州,510515;第一军医大学细胞生物学教研室,广东,广州,510515;第一军医大学细胞生物学教研室,广东,广州,510515;第一军医大学细胞生物学教研室,广东,广州,510515;第一军医大学细胞生物学教研室,广东,广州,510515;第一军医大学细胞生物学教研室,广东,广州,510515 |
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| 摘 要： | 目的构建人全长PLCγ1基因真核表达载体,以便进一步研究PLCγ1的作用及其机制。方法自行设计一对带有HindⅢ和NotⅠ酶切位点的引物,采用RT-PCR技术从MG63细胞中扩增人全长PLCγ1cDNA(3878bp),纯化后,经HindⅢ-NotⅠ酶切,插入真核表达载体pLNCX2中,构建重组质粒pLNCX2/PLCγ1。通过PCR,限制性酶切分析及DNA直接测序对所构建的重组质粒进行鉴定。同时经瞬时转染后,利用RT-PCR及Westernblotting转染后LoVo细胞中PLCγ1的表达。结果RT-PCR产物经琼脂糖电泳分析所得片段大小与预期相符(3878bp)。重组质粒经HindⅢ-NotⅠ酶切后,得到3878bp(PLCγ1基因)及6100bp(载体pLNCX2)两个片段,同时重组质粒经HindⅢ-BglⅡ酶切后,得到约1300bp及约8500bp两个片段,与预期一致。DNA测序也证实了重组质粒的正确。经RT-PCR和Westernblot分析证实转染pLNCX2/PLCγ1的LoVo细胞中PLCγ1的表达均高于转染空质粒pLNCX2的LoVo细胞及未转染的LoVo细胞。结论成功构建了人全长PLCγ1基因真核表达载体pLNCX2/PLCγ1,为进一步研究PLCγ1的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | PLCγ1基因 真核表达载体 RT-PCR 构建 鉴定 |
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