沉默Etheràgo-go1基因调控VEGF／PI3K／AKT抑制骨肉瘤增殖和血管生成的研究

目的：检测沉默 Ether àgo-go 1（Eag1）基因对骨肉瘤增殖和血管生成的影响及其可能的调控机制。方法：构建抑制 Eag1表达的短发卡 RNA （short hair RNA，shRNA）重组腺病毒载体 Ad5-Eag1-shRNA 并感染骨肉瘤细胞株。采用实时定量聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction，Real-time PCR）和蛋白印迹技术（Western blot analysis，WB）检测 Ad5-Eag1-shRNA 的感染效能。采用 CCK-8法和裸鼠成瘤实验检测感染前后骨肉瘤细胞增殖和裸鼠骨肉瘤体积的变化。采用免疫组化技术和 WB 技术分别检测感染前后裸鼠肿瘤组织中微血管密度（microvessel density，MVD）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的变化。采用 WB 技术检测感染前后骨肉瘤细胞中 VEGF、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）和蛋白激酶 B （protein kinase B，AKT）的表达变化。结果：构建的重组腺病毒载体 Ad5-Eag1-shRNA 具有良好的感染效能。感染Ad5-Eag1-shRNA 可沉默骨肉瘤中 Eag1的表达并能有效地抑制骨肉瘤细胞增殖和裸鼠骨肉瘤生长（均 P ＜0.001），同时下调裸鼠骨肉瘤组织中 MVD 密度和 VEGF 的表达（均 P ＜0．001）。感染 Ad5-Eag1-shRNA 可下调骨肉瘤细胞中 VEGF 的表达（P ＜0.05）并抑制 PI3K 和 AKT 的磷酸化（均 P ＜0．001）。结论：沉默 Eag1可能通过调控 VEGF ／PI3K／AKT 信号通路抑制骨肉瘤增殖和血管生成。