| 幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达 |
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| 引用本文： | 韩飞,杨致邦.幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达[J].重庆医科大学学报,2010,35(6). |
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| 作者姓名： | 韩飞 杨致邦 |
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| 作者单位： | 重庆三峡中心医院微免科,重庆,404000;重庆医科大学基础医学院:病原生物学教研室;神经科学研究中心;基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室,重庆400016 |
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| 基金项目： | 重庆市教委项目，重庆市科委攻关项目 |
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| 摘 要： | 目的:重组表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp1188基因,为研究该基因所编码蛋白在H.pylori的黏附过程中的作用奠定基础.方法:以H.pylori标准株NCTC 11637基因组DNA为模板,PCR扩增hp1188基因片段,克隆至质粒pQE-30中获得重组质粒pQE30-hp1188,经DNA测序确认后将重组质粒转化大肠杆菌DH5 α,IPTG诱导表达.Ni2+-NTA树脂亲和层析纯化表达蛋白,SDS-PAGE检测表达,Western blot鉴定相应抗原表位.结果:扩增的hp1188基因片段全长810 bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%.SDS-PAGE显示表达产物相对分子量约为30 600 Dalton,与预期相符;大肠杆菌裂解液中表达产物接近可溶性蛋白总量的一半,但沉淀中仍能检测到表达蛋白.目标蛋白纯化后均一性接近90%,Western blot证实与多克隆抗体有良好结合能力.结论:成功克隆了hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达.
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| 关 键 词： | 幽门螺杆菌 hp1188基因 表达 |
Prokaryotic expression of Helicobacter pylori gene hp1188 |
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