| 摘 要： | 目的 探讨微小 RNA-375（miR-375）通过调控自噬相关蛋白（Atg）14 介导的自噬对肝癌细胞（SMMC-7721）增殖和转移能力的影响。方法 将SMMC-7721细胞分别用miR-375模拟物、抑制物以及Atg14的干扰RNA处理,并建立缺氧1 h复氧6 h的模型,分为miR-375 NC组、miR-375 mimics组、miR-375 inhibitor组以及siRNA NC组、Atg14 siRNA 组、miR-375+Atg14 siRNA 组。TargetScan 预测 miR-375 与 Atg14 基因相关性。荧光实时定量 PCR（qRT-PCR）检测miR-375 NC组、miR-375 mimics组、miR-375 inhibitor组miR-375、Atg14 mRNA相对表达量。免疫细胞化学染色检测3组细胞内N-钙黏素（N-Cadherin）和β-连环蛋白（β-catenin）表达分布情况。绿色荧光蛋白-红
色荧光蛋白-轻链（mGFP-RFP-LC3）自噬双标腺病毒转染3组细胞,荧光显微镜下观察自噬体形成情况。平板克隆检测肝癌细胞增殖情况。Western blot 检测Atg14、泛素结合蛋白（P62）、轻链3Ⅰ（LC3Ⅰ）、轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、酵母Atg6同源物（Beclin1）、N-Cadherin、β-catenin和波形蛋白（Vimentin）表达情况。结果 miR-375与Atg14基因相关性较高,qRT-PCR显示过表达miR-375能抑制Atg14 mRNA表达;反之能促进Atg14 mRNA表达。过表达miR-375能抑制肝癌细胞内N-Cadherin表达、提高β-catenin表达水平,抑制肝癌细胞增殖能力（P＜0.01）;而抑制miR-375表达能促进N-Cadherin表达、降低β-catenin表达水平,提高肝癌细胞增殖能力（P＜0.01）。过表达miR-375能抑制Atg14、LC3Ⅱ、Beclin1表达,促进P62表达（P＜0.01）;反之能促进Atg14、LC3Ⅱ、Beclin1表达,抑制P62表达（P＜0.01）。荧
光显微镜下观察到过表达 miR-375 可抑制自噬体形成,而抑制 miR-375 表达能促进自噬体形成（P＜0.01）。干扰Atg14表达后可增强miR-375对肝癌细胞增殖、转移能力的抑制作用（P＜0.01）。结论 激活miR-375能抑制肝癌细胞增殖和转移,而抑制miR-375能促进肝癌细胞增殖和转移,其机制可能与miR-375通过靶向调控Atg14抑制自噬,从而抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖和转移有关。
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