| 基于CRISPR-Cas13a技术的乙型肝炎病毒ccDNA检测方法临床应用评价 |
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| 引用本文： | 田原,万妍,徐玲,张向颖,任锋,吴剑.基于CRISPR-Cas13a技术的乙型肝炎病毒ccDNA检测方法临床应用评价[J].临床检验杂志,2022,40(12):886-890. |
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| 作者姓名： | 田原 万妍 徐玲 张向颖 任锋 吴剑 |
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| 作者单位： | 首都医科大学附属北京佑安医院北京肝病研究所;首都体育学院运动科学与健康学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(81770611,82002243);北京自然科学基金和北京市教委联合资助重点项目(KZ202010025035);首都卫生发展科研专项重点攻关项目(首发2020-1-1151, 首发2021-1G-2181);北京市优秀人才培养项目(201 800021469G289) ;北京市医院管理中心“青苗”计划专项经费资助( QML20201702)。 |
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| 摘 要： | 摘要:目的评价基于CRISPR-Cas13a技术的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(ceDNA)检测方法的应用价值。方法收集25例HBV感染患者和5例非HBV感染患者的肝组织标本,提取肝组织的总DNA,依次使用HindII内切酶和质粒安全
性ATP依赖DNA酶(PSAD)消化;设计HBV cceDNA的特异性引物,扩增消化后的产物;利用CRISPR/Cas13a技术建立CRISPR-HBV cceDNA检测方法,通过HBV cceDNA质粒和临床样本对该方法进行评价,并利用数字PCR和荧光定量PCR方
法进行比较。结果本研究建 立的方法检测HBV cccDNA质粒的灵敏度为1 copies/μL,显著高于数字PCR( 10 opies/μL,P<0.01)和荧光定量PCR( 10'' copies/uL,P<0.01);建立的方法检测HBV cceDNA阳性样本的灵敏度为1 copies/uL,与数字PCR
相同,高于荧光定量PCR( 10 copies/ μL,P<0.01);建立的方法对25例HBV感染的临床肝组织样本的检出阳性率为80%,均高于数字PCR(64%)和荧光定量PCR(48%)。结论本研究 建立的CRISPR-HBV cceDNA检测方法在乙肝患者肝组织标本
HBVcccDNA检测中具有较高的灵敏度,为评价乙肝患者的临床治疗效果和监测停药复发等情况提供了有效帮助。
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| 关 键 词： | 关键词:CRISPR-Cas13a 乙型肝炎病毒 共价环状闭合DNA 数字PCR 荧光定量PCR |
| 收稿时间： | 2022/10/8 0:00:00 |
Clinical application evaluation of the detection method for hepatitis B virus cccDNA based on CRISPR-Cas13a technology |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Key words: CRISPR-Cas13a hepatitis B virus covalently closed circular DNA digital PCR fluorescence quantitative PCR |
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