| 摘 要： | 目的探讨TCOF1 mRNA表达下降对人胚胎干细胞系H9来源神经嵴细胞(H9-NCC)凋亡的影响, 并阐明对TCOF1表达发挥转录后调控作用的微RNA(miRNA)以及致畸因子视黄酸(RA)调控TCOF1表达的作用和机制。方法将人胚胎干细胞系H9诱导为H9-NCC, 通过免疫荧光染色、流式细胞分析检测神经嵴细胞(NCCs)表面标志物P75、HNK-1、AP2, 通过实时定量PCR(RT-qPCR)检测NCCs标志物基因SOX9、ZIC1、AP2、P75、PAX3和SOX10表达情况。采用针对TCOF1基因的慢病毒RNA干扰载体(sh-TCOF1)在H9-NCC中敲减TCOF1, 并设阴性对照组(sh-Scramble), 观察细胞凋亡状况。通过生物信息学分析, 预测可能与TCOF1 mRNA结合的miRNA为miR-654-5p, 利用该miRNA的模拟物, 并设阴性对照, 采用RT-qPCR方法观察对TCOF1 mRNA水平的影响。用0.1 μmol/L终浓度的RA处理H9-NCC, 观察对TCOF1 mRNA表达的影响。预测TCOF1上游转录因子(HOXA3)并通过RNA干扰技术敲...
|
