| 核转染对成体骨髓源性干细胞的影响 |
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| 引用本文： | 李震,沈晓涛,曹亮,毛颖玉,陈斯韵,郑馨,蔡冬青. 核转染对成体骨髓源性干细胞的影响[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2011, 15(1): 1-6. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.01.001 |
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| 作者姓名： | 李震 沈晓涛 曹亮 毛颖玉 陈斯韵 郑馨 蔡冬青 |
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| 作者单位： | 暨南大学再生医学教育部重点实验室,广东省广州市,510632;暨南大学再生医学香港中文大学-暨南大学联合实验室,广东省广州市,510632;暨南大学科技部及广东省科技厅国际科技合作基地,广东省广州市,510632 |
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| 基金项目： | 国家“863”项目(2007AA02Z105),课题名称:针对缺血心脏血管改变靶向子的鉴定及其效应的研究; 国家自然科学基金项目(30973158),课题名称:与心脏衰老相关表型的功能研究,国家自然科学基金项目(30770886),课题名称:BDNF-TrkB通路与老年缺血坏死心肌再生相关机制的研究,国家自然科学基金项目(30570369),课题名称:心脏血管特异性靶向短肽H1靶向介导缺血心肌血管新生的研究,国家自然科学基金项目(30340038),课题名称:新筛选能特异性靶向心脏血管短肽的作用研究; 广东省自然科学基金重点项目(04105826),课题名称:新筛选心脏血管特异性短肽的靶向作用研究; 广东省科技攻关项目(2004B30601007),课题名称:老年心脏血管新生功能下降的蛋白组学研究; 广东省国际合作项目中央高校基本科研业务费专项资金~~ |
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| 摘 要： | 背景:成体骨髓源性干细胞是实施细胞治疗的重要细胞来源。对成体骨髓源性干细胞的示踪,是研究其移行、分化的规律与机制并进一步阐明再生潜能、疗效的关键。目的:探讨经转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,在细胞表型、增殖能力、心肌分化潜能是否存在的影响。方法:应用核转染技术利用U-23程序将编码maxGFP报告基因的载体对成体骨髓呈克隆样干细胞进行转染,应用MTT法对核转染前后的生长曲线进行测定,使用3μmol/L5-氮胞苷对核转染前后成体骨髓呈克隆样干细胞进行向心肌分化诱导,并利用RT-PCR对向心肌分化的特异性标记物GATA4与MLC-2v的表达进行测定。使用成年SD大鼠心肌梗死左前降支结扎模型,对使用经maxGFP转染的成体骨髓呈克隆样干细胞施心内注射并于注射后的第2天和第7天对经注射心脏行冰冻切片并观察maxGFP在体内的表达情况。结果与结论:经核转染24h后,第47代及第119代成体骨髓呈克隆样干细胞的转染率为49.4%和43.1%,转染后5h,开始出现呈绿色荧光阳性的细胞,经核转染后仍能保持小圆球形、可贴壁、呈克隆样生长。MTT检测结果显示:核转染前后第47代及第119代均具有相似的生长曲线。核转染前第47代及119代细胞平均群体倍增时间分别为8.57,10.28h;核转染后分别为9.42,10.42h,各代前后比较差异无显著性意义(P=0.551,P=0.774)。RT-PCR检测结果显示:核转染前5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强;核转染后5-氮胞苷处理前后均表达GATA4,处理后MLC-2v条带更强,上述2个向心肌分化指标于转染前后变化并不明显。体内实验结果:心内注射经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞,第2天及第7天可在经注射心肌中发现有少量绿色荧光阳性的细胞。提示,核转染可快速地将外源基因导入细胞,经核转染后的成体骨髓呈克隆样干细胞仍能保持其细胞形态、增殖能力及向心肌分化潜能,然而,经maxGFP基因核转染的成体骨髓呈克隆样干细胞,移植入心肌后只有少数细胞能表达经转染基因。
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| 关 键 词： | 成体骨髓呈克隆样干细胞 核转染 增殖 分化 示踪 |
Nucleofection effects on adult bone marrow-derived stem cells |
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| Li Zhen,Shen Xiao-tao,Cao Liang,Mao Ying-yu,Chen Si-yun,Zheng Xin,Cai Dong-qing. Nucleofection effects on adult bone marrow-derived stem cells[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2011, 15(1): 1-6. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.01.001 |
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| Authors: | Li Zhen Shen Xiao-tao Cao Liang Mao Ying-yu Chen Si-yun Zheng Xin Cai Dong-qing |
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| Affiliation: | Li Zhen1,2,3,Shen Xiao-tao1,Cao Liang1,Mao Ying-yu1,Chen Si-yun1,Zheng Xin1,Cai Dong-qing1,3 Key Laboratory for Regenerative Medicine,Ministry of Education,2Joint Laboratory for Regenerative Medicine,the Chinese University of Hong Kong-Jinan University,3The International Base of Collaboration for Science & Technology (Ji Nan University),The Ministry of Science and Technology & Guangdong Province,Jinan University,Guangzhou 510632,Guangdong Province,China |
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| Abstract: | BACKGROUND:Adult bone marrow-derived stem cells are promising cell source in cell therapy. Tracking of adult bone marrow-derived stem cells is crucial to demonstrate the mechanism of stem cell migration and differentiation,and develop novel strategy for functional regeneration and stem cell therapy. OBJECTIVE:To explore effects of transfected adult bone marrow clonogenic stem cells (AMCSCs) on cell phenotype,proliferation and cardiac differentiation potential. METHODS:Plasmid-encoded reporter gene maxGFP wa... |
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