| 恶性疟原虫海南株Pfs40基因原核表达载体的构建和序列分析 |
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| 引用本文： | 单志新,余新炳,等.恶性疟原虫海南株Pfs40基因原核表达载体的构建和序列分析[J].中国人兽共患病杂志,2001,17(1):21-25. |
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| 作者姓名： | 单志新 余新炳 |
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| 作者单位： | 单志新（中山医科大学寄生虫学教研室 广州,510089）
余新炳（中山医科大学寄生虫学教研室 广州,510089）
李学荣（中山医科大学寄生虫学教研室 广州,510089）
马长玲（中山医科大学寄生虫学教研室 广州,510089）
方建民（中山医科大学寄生虫学教研室 广州,510089） |
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| 基金项目： | 中山医科大学“211”重点学科建设课题资金，广东省自然科学资金，教育部博士点基金及国家“九*五”攻关项目资金资助 |
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| 摘 要： | 目的 构建恶性疟原虫海南（FCC1/HN）株膜相关钙结合蛋白（Pfs40）基因编码区的原核表达载体，测定Pfs40基因编码区的序列，了解该虫株与其它虫株Pfs40基因序列的差异。方法 根据Pfs40基因已知序列设计合成一对引物，用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pfs40基因编码区；EcoRV酶切鉴定PCR产物；将Pfs40基因插入原核表达载体PET28a，转化大肠杆菌DH5a感受态细胞，于卡那阳性LB培养平板上筛选阳性克隆，酶切，PCR扩增鉴定；用双脱氧链末端终止法进行测序，应用软件对Pfs40核苷酸及推测氨基酸序列进行分析。结果 PCR扩增获得1032bp的Pfs40基因，EcoRV酶切表明扩增产物正确；重组质粒经双酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子；恶性疟原虫FCC1/HN株与7G89株Pfs40基因核苷酸序列同源性为99.5%，编码氨基酸序列同源性为99.1%。Pfs40理论蛋白质有5个钙结合区EF-hand结构；4个明显的抗原表位区段。结论 从恶性疟原虫基因的DNA中获取Pfs40基因，并成功构建恶性疟原虫FCC1/HN株Pfs40基因编码区的原核表达载体；FCC1/HN株与7G8株Pfs40基因有高度的同源性。
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| 关 键 词： | 恶性疟原虫 膜相关结合蛋白 聚合酶链反应 序列分析 原核表达载体 |
| 文章编号： | 1002-2694(2001)01-21-05 |
| 修稿时间： | 2000年10月4日 |
CONSTRUCTION OF PROKARYOTIC EXPRESSION PLASMID AND SEQUENCE ANALYSIS OF PFS40 GENE OF PLASMODIUM FALCIPARUM HAINAN ISOLATE |
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| SHAN Zhixin,YU Xinbing,LI Xuerong,MA Changling,FANG Jianmin.CONSTRUCTION OF PROKARYOTIC EXPRESSION PLASMID AND SEQUENCE ANALYSIS OF PFS40 GENE OF PLASMODIUM FALCIPARUM HAINAN ISOLATE[J].Chinese Journal of Zoonoses,2001,17(1):21-25. |
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| Authors: | SHAN Zhixin YU Xinbing LI Xuerong MA Changling FANG Jianmin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Plasmodium falciparum Membrane-associated calcium-binding protein Polymerase Chain Reaction Cloning Gene sequencing |
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