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| 骨髓基质细胞中Von Hippel-Lindau基因的siRNA表达载体构建及其检测 | |
| 引用本文： | 邹多宏,赵君,夏伦果,张秀丽,蒋欣泉,黄远亮. 骨髓基质细胞中Von Hippel-Lindau基因的siRNA表达载体构建及其检测[J]. 上海口腔医学, 2010, 19(4) |
| 作者姓名： | 邹多宏 赵君 夏伦果 张秀丽 蒋欣泉 黄远亮 |
| 作者单位： | 1. 同济大学口腔医学院,上海200072;同济大学附属东方医院,口腔科,上海,200120 2. 上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院,口腔颌面外科,上海,200011 3. 上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院,口腔组织工程实验室,上海,200011 4. 同济大学附属东方医院,口腔科,上海,200120 |
| 基金项目： | 上海市科学技术委员会资助项目，上海市口腔医学重点实验室开放基金 |
| 摘 要： | 目的:构建骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells BMSCs)中Von Hippel-Lindau(VHL)基因的siRNA表达载体并检测其对BMSCs细胞中VHL基因的干扰作用.方法:根据犬的VHL基因序列设计并合成4对siRNA oligo,然后用载体构建试剂盒进行重组克隆,将4对双链的siRNA oligo分别插人到siRNA表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR中,构建4个siRNA表达质粒(SR144-1,SR144-2,SR144-3,SR144-4).用载体通用引物进行菌落PCR筛选,筛选得到的阳性克隆进行测序,以验证重组克隆中插入片段序列是否与设计的oligo序列一致.干扰载体瞬时转染BMSCs,通过qPCR和Westerm印迹分别检测干扰载体对目的基因的沉默效果.为了提高转染效率及VHL基因的沉默效果,对SR144-4进行慢病毒干扰载体(pLenti-mi-VHL)构建.结果:通过对构建质粒克隆进行测序,证实重组克隆中插入片段序列与设计的oligo序列一致.转染BMSCs细胞24h和48h后分别用qPCR与Western印迹检测,显示SR144-4干扰效果最理想.通过测序结果比对,插入序列完全正确.pLenti-mi-VHL构建成功.结论:成功构建了BMSCS的siRNA-VHL表达载体,为进一步实验研究奠定了基础. |
| 关 键 词： | Von Hippel-Lindau基因 骨髓基质细胞 siRNA干扰 低氧诱导因子 |
Construction and detection of gene expression vector of the Von Hippel-Lindau in bone marrow stromal cells |
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| ZOU Duo-hong,ZHAO Jun,XIA Lun-guo,ZHANG Xiu-li,JIANG Xin-quan,HUANG Yuan-liang. Construction and detection of gene expression vector of the Von Hippel-Lindau in bone marrow stromal cells[J]. Shanghai journal of stomatology, 2010, 19(4) | |
| Authors: | ZOU Duo-hong ZHAO Jun XIA Lun-guo ZHANG Xiu-li JIANG Xin-quan HUANG Yuan-liang |
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