抗CD44抗体单链抗体构建及表达 |
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作者姓名: | 宋国丽 李彬 吴立华 刁世勇 韩忠朝 |
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作者单位: | [1]广东省深圳大学生命科学学院,518060 [2]中国医学科学院/中国协和医科大学血液学研究所,518060 |
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摘 要: | 目的 构建抗CD44抗体的单链抗体(anti-CD44-ScFv),为进一步应用基因工程抗体研究打下基础。方法 从分泌抗CD44单克隆抗体的杂交瘤细胞系HII44a中提取总RNA,经RT-PCR分离获得了轻、重链可变区(VL、VH)基因,用连接肽将其构建成具有VL-Linker-VH结构的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到分泌型蛋白表达载体PEV22b(+)中进行表达。结果 经测序表明,VH、VL及Linker的序列正确。ScFv在大肠杆菌中的表达量约占菌体总蛋白的16%。能够特异性与CD44抗原结合。结论 成功构建抗CD44抗体单链抗体,为进一步制备基因工程抗体奠定了基础。
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关 键 词: | 基因 克隆 单链抗体 基因表达 抗CD44抗体 |
收稿时间: | 2005-07-18 |
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