| 摘 要： | 目的：人端粒酶蛋白亚基（hTERT）单克隆抗体制备及肿瘤检测应用。方法：利用多肽固相合成法（Fmoc法）合成hTERT抗原多肽,免疫BALB／c小鼠,以杂交瘤法制备单克隆抗体。应用ELISA,Western blot和免疫组织化学ABC法进行鉴定和肿瘤检测。结果：经合成得到hTERT抗原多肽hTERT9,免疫小鼠及细胞融合后得到抗hTERT9杂交瘤细胞;经３次有限稀释法及ELISA筛选获得抗hTERT9单克隆抗体的杂交瘤细胞H4、G8和A11;H4、G8为IgM类,而A11为IgG1。半抗原竞争性抑制实验证明为hTERT9特异性单克隆抗体;相对亲和力实验发现G8株亲和力较H4株和A11株强。用H4及G8株单克隆抗体检测HeLa、293细胞,免疫印迹有特异相对分子质量≈123000hTERT条带,免疫组织化学显示为细胞核着色,而正常细胞2BS无阳性反应。免疫组织化学方法检测人癌组织、癌前病变、良性病变hTERT表达发现：人肿瘤组织细胞阳性率为80．31％（102／127）,且大多为中度阳性和强阳性;癌前病变中,hTERT有17．5％（7／40）弱阳性;良性肿瘤均为阴性。统计学分析表明：hTERT在癌组织的表达显著高于癌前及良性病变（P＜0．01）。结论：通过固相合成hTERT抗原多肽和杂交瘤技术成功制备抗人端粒酶蛋白亚基hTERT单克隆抗体,并能运用于免疫印迹、免疫组织化学对癌细胞及组织的hTERT表达检测。
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