| 弓形虫致密颗粒抗原GRA8的原核和真核表达质粒的构建 |
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| 引用本文： | 袁仕善 吴少庭 黄达娜 张仁利 高世同 林绮萍 余新炳. 弓形虫致密颗粒抗原GRA8的原核和真核表达质粒的构建[J]. 中国人兽共患病杂志, 2004, 20(3): 203-206,210 |
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| 作者姓名： | 袁仕善 吴少庭 黄达娜 张仁利 高世同 林绮萍 余新炳 |
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| 作者单位： | [1]深圳市疾病预防控制中心，深圳518020 [2]中山大学基础医学院 |
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| 摘 要： | 目的 构建弓形虫RH株致密颗粒抗原GRA8的原核和真核重组表达质粒。方法 参照GRA8序列分别设计引物。采用PCR从弓形虫RH株基因组DNA中分别扩增出编码GRA8的基因片段，克隆至pMD18-T载体；菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析；各组阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达质粒pGEX-4T-2和真核表达载体pVAXl，分别转化大肠杆菌BL21和JM109,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列；将构建的原核表达菌株经IPTG诱导，SDS—PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达；将构建的真核重组表达质粒免疫小鼠，观察其诱导的抗体应答。结果 PCR扩增出GRA8基因的特异片段。各组阳性克隆的序列正确，并分别被亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-2和真核表达载体pVAXl上，构建了弓形虫致密颗粒抗原GRA8的原核和真核重组表达质粒；原核表达质粒在大肠杆菌中表达了GRA8的融合蛋白；真核重组表达质粒诱导小鼠产生了抗弓形虫抗原的抗体。结论以pGEX-4T-2和pVAX1为载体，分别成功构建了GRA8的原核和真核重组表达质粒
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| 关 键 词： | 弓形虫 致密颗粒抗原 GRA8 原核 真核表达质粒 |
| 文章编号： | 1002-2694(2004)03-0203-04 |
Construction of prokaryotic and eukaryotic expression plasmids with Toxoplasma gondii GRA8 |
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| YUAN Shi-shan,WU Shao-ting,HUANG Da-na,ZHANG Ren-li,GAO Shi-tong,LIN Qi-ping,YU Xin-bing. Construction of prokaryotic and eukaryotic expression plasmids with Toxoplasma gondii GRA8[J]. Chinese Journal of Zoonoses, 2004, 20(3): 203-206,210 |
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| Authors: | YUAN Shi-shan WU Shao-ting HUANG Da-na ZHANG Ren-li GAO Shi-tong LIN Qi-ping YU Xin-bing |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Toxoplasma gondii dense granule antigen GRA8 cloning expression |
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