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| 反转录病毒载体介导RNA干扰抑制EphA2在Hela细胞中的蛋白表达 | |
| 引用本文： | 吴丹,李珊珊,索振河.反转录病毒载体介导RNA干扰抑制EphA2在Hela细胞中的蛋白表达[J].中国组织工程研究与临床康复,2007,11(37):7401-7404. |
| 作者姓名： | 吴丹 李珊珊 索振河 |
| 作者单位： | 1. 上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院,上海市,200030 2. 郑州大学第一附属医院病理科,河南省郑州市,450052 3. 威奥斯陆大学附属肿瘤医院癌症研究中心,挪威奥斯陆,0310 |
| 基金项目： | 教育部、211工程重点学科建设项目;河南省科技攻关项目;挪威国家肿瘤医院访问学者基金 |
| 摘 要： | 目的：课题前期发现EphA2和配体EphrinAl在宫颈鳞癌细胞和肿瘤相关血管内皮细胞均呈高表达，为基因治疗宫颈癌提供了理想的靶向。以此为基础，利用反转录病毒载体介导的RNA干扰抑制EphA2在Hela宫颈癌细胞中的蛋白表达。方法：实验于2006—01／06在河南省肿瘤病理重点实验室完成。①实验材料：PA317细胞、Hela229细胞购自上海生化细胞所，小鼠NIH3T3细胞为本室保存。EphA2兔抗人多克隆抗体，Actin兔抗人多克隆抗体（美国SantaCruz公司）。②实验方法：从EphA2的mRNA全序列中筛选出1个19nt的靶序列，设计双链发夹结构。以siRNA互补双链寡核苷酸，构建反转录病毒表达载体pSIREN—EphA2，提取质粒，用BglⅡ和EcoRⅠ双酶切进行鉴定。选择经酶切鉴定的正确克隆测序。挑选pSIREN．EphA2抗性克隆细胞扩增，检测转染后Hela细胞中EphA2蛋白的表达水平。结果：@pSIREN-EphA2重组质粒的酶切鉴定：双酶切后形成328bp和6182bp两条电泳条带。②pSIREN-EphA2重组质粒测序：结果与已知序列完全一致。（DEphA2蛋白的表达：经Westernblot分析，重组pSIREN—EphA2转染的Hela细胞中EphA2蛋白表达水平明显降低。结论：通过反转录病毒载体介导的RNA干扰，能够抑制EphA2在Hela细胞中的蛋白表达，为以EphA2为靶点的宫颈癌基因治疗提供新的思路和手段。 |
| 关 键 词： | 反转录病毒载体 RNA干扰 |
| 文章编号： | 1673-8225（2007）37-07401-04 |
| 修稿时间： | 2007-06-26 |
Retrovirus vector-mediated RNA interference inhibits EphA2 protein expression in Hela cells |
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| Wu D,Li SS,Suo ZH.Retrovirus vector-mediated RNA interference inhibits EphA2 protein expression in Hela cells[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2007,11(37):7401-7404. | |
| Authors: | Wu D Li SS Suo ZH |
| Institution: | Intemational Peace Matemity and Child Health Hospital Affiliated to Medical College, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200030, China; 2Department of Pathology, First Affiliated Hospital, Zhengzhou University, Zhengzhou 450052. Henan Province. China; The Norwegian Radium Hospital, Oslo University, Oslo 0310, Norway |
| Abstract: | |
| Keywords: | EphA2 |
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