| 噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库的构建 |
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| 引用本文： | 何俊,周霞,陈璐,陈秋莉,王锦红,蒋少华,陈铭,卢海妹,潘卫,邓松华. 噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库的构建[J]. 安徽医科大学学报, 2007, 42(2): 128-132 |
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| 作者姓名： | 何俊 周霞 陈璐 陈秋莉 王锦红 蒋少华 陈铭 卢海妹 潘卫 邓松华 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学病理生理学教研室,合肥,230032;山西省临床检验中心,太原,030001;第二军医大学微生物教研室,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（编号：30472050）;安徽省自然科学基金项目（编号：050430706） |
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| 摘 要： | 目的构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选及结构和功能的研究打下基础。方法应用overlapping PCR制备Protein A的Z结构域。用含随机核苷酸序列的引物,制备对Z结构域的第10、13、27、28、31和32位氨基酸进行随机突变的定点随机突变体库。并在突变体片段两端引入KpnⅠ位点,3′端引入3个氨基酸大小随机连接肽的序列。经KpnⅠ酶切后随机连接,克隆于噬菌粒展示载体pCANTAB5S。克隆产物转化大肠杆菌TG1,辅助噬菌体M13K07拯救,构建噬菌体展示定点随机突变组合文库。结果该定点随机突变组合文库的转化子数目为6.4×106个,滴度为1.4×1015TU/L;文库中含0.72以上的阳性克隆,其中有2个单结构域的阳性克隆占0.15;15个样品的序列分析显示各突变位点和随机连接肽的氨基酸序列呈随机性分布。结论成功构建了噬菌体展示免疫球蛋白结合分子定点随机突变组合文库,该库库容量在一级结构上具有良好的随机性和多样性,可满足体外分子进化研究的要求。
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| 关 键 词： | 细菌噬菌体/遗传学 基因文库 |
| 文章编号： | 1000-1492（2007）02-0128-05 |
| 收稿时间： | 2007-02-09 |
| 修稿时间： | 2007-02-09 |
Construction of phage-displayed site-directed random mutation combinatorial library of immunoglobulin-binding molecules |
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| He Jun, Zhou Xia, Chen Lu, et al. Construction of phage-displayed site-directed random mutation combinatorial library of immunoglobulin-binding molecules[J]. Acta Universitis Medicinalis Anhui, 2007, 42(2): 128-132 |
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| Authors: | He Jun Zhou Xia Chen Lu et al |
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| Affiliation: | Dept of Pathophysiology,Anhui Medical University, Hefei 230032 |
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| Keywords: | bacteriophages/genetics gene library |
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