结核分支杆菌H37Rv株菌体抗原单克隆抗体制备、特性分析及纯化

目的　利用单克隆抗体技术分析分支杆菌多肽抗原的共性和个性 ,建立纯化单克隆抗体的最佳方法。方法　按常规方法制备单克隆抗体。分泌单克隆抗体阳性杂交细胞株的筛选采用ELISA法 ,确认采用免疫印迹法。 2 4种分支杆菌菌株均生长于改良罗氏培养基上 ,H3 7Rv株分别生长于改良罗氏培养基和苏通液体培养基上。单克隆抗体的纯化采用硫酸铵沉淀法、辛酸沉淀法和离子交换法。结果　经筛选获得 14株单克隆抗体杂交细胞瘤。其中 ,C2 、7C12 单克隆抗体所抗的 76 0 0 0、16 0 0 0抗原成份为分泌抗原 ,76 0 0 0抗原存在于 2 4种分支杆菌菌体中 ,为共同抗原。 16 0 0 0抗原仅存在于H3 7Rv ,H3 7Ra,牛分支杆菌 ,BCG株中。单克隆抗体免疫印迹结果显示 ,分支杆菌H3 7Rv株在不同培养条件下 ,其 40 0 0 0 / 380 0 0多肽抗原表达不同。单克隆抗体纯化以硫酸铵沉淀法回收率最高 ,离子交换法获得的单抗纯度最高 ,辛酸沉淀法可以有效地去除白蛋白 ,并具有简单、省时等优点。单克隆抗体的相对亲和力均在 10 -4 ～ 10 -7之间。结论　C2 、7C12 单克隆抗体均抗结核分支杆菌H3 7Rv株的分泌抗原成份。 40 0 0 0 / 380 0 0多肽抗原为结核分支杆菌H3 7Rv株固体培养菌体特有。单抗纯化结果显示离子交换层析法适用于科研分析 ,而辛酸

Production, characterization and purification of monoclonal antibodies against antigens of Mycobacterium tuberculosis H_(37)Rv strain