| HDAC2磷酸化区域突变体的构建及其对小鼠成纤维细胞增殖的影响 |
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| 引用本文： | 肖勇,黄宏,郭韡,邢伟,李向云,袁培淞,徐祥. HDAC2磷酸化区域突变体的构建及其对小鼠成纤维细胞增殖的影响[J]. 重庆医学, 2015, 44(13): 1729-1731. DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2015.13.001 |
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| 作者姓名： | 肖勇 黄宏 郭韡 邢伟 李向云 袁培淞 徐祥 |
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| 作者单位： | 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所/创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第一研究室,重庆,400042 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家重点实验室自主研究课题基金 |
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| 摘 要： | 目的 应用片段缺失突变技术鉴定HDAC2自身磷酸化对其Sumo-E3连接酶活性及蛋白质翻译的影响.方法 以前期获得的鼠源性HDAC2 Sumo-E3连接酶结构域基因片段为模板,设计片段缺失突变引物,经长片段重叠延伸PCR技术扩增获得片段缺失突变基因片段,后于Top10大肠杆菌中自然连接扩增获得pcDNA3.1/HDAC2-Sumo-E3连接酶磷酸化结构域缺失突变的真核表达载体.然后将载体转染于L929成纤维细胞瞬时过表达突变基因,再经翻译反应性荧光素酶报告基因实验和Western-blot鉴定HDAC2自身磷酸化修饰对Sumo-E3连接酶介导的报告基因和靶蛋白质表达的影响.最后通过MTT实验检测HDAC2自身磷酸化修饰对其Sumo-E3连接酶介导的L929细胞增殖的影响.结果 成功构建获得磷酸化修饰完全缺失的HDAC2片段缺失突变体pcDNA3.1/HDAC2-Sumo-E3(DEL 394-424AA).LUC报告基因检测结果显示,DEL 394-424AA片段缺失突变体促进LUC翻译是对照组的4.24倍,且能显著促进靶蛋白ODC和c-Myc的表达,以及L929小鼠成纤维细胞的增殖效应.结论 HDAC2自身磷酸化修饰对HDAC2 Sumo-E3连接酶活性及其调节的蛋白质翻译和细胞增殖作用起负性调节作用.
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| 关 键 词： | HDAC2 Sumo-E3连接酶 磷酸化修饰 突变体构建 成纤维细胞 |
Construction of phosphorylation site mutant of HDAC2 and its impact on proliferation of mouse fibroblasts |
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| Xiao Yong,Huang Hong,Guo Wei,Xing Wei,Li Xiangyun,Yuan Peisong,Xu Xiang. Construction of phosphorylation site mutant of HDAC2 and its impact on proliferation of mouse fibroblasts[J]. Chongqing Medical Journal, 2015, 44(13): 1729-1731. DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2015.13.001 |
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| Authors: | Xiao Yong Huang Hong Guo Wei Xing Wei Li Xiangyun Yuan Peisong Xu Xiang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | histone deacetylases Sumo-E3 ligase phosphorylation mutation construction fibroblasts |
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