ICOS 在健康人外周血调节性T 细胞上的生物学特征初探

目的:研究ICOS 在健康人外周血Treg 离体培养中的作用,了解mTOR 对离体培养Treg ICOS 表达的调控。方法:MACS 分选Treg 后经anti-CD3+anti-CD28 磁珠刺激后第3、7 天流式检测Treg 表面ICOS 表达情况;anti-CD3+anti-CD28抗体或anti-CD3+ICOSL-Fc 刺激3 d,流式检测Treg ICOS 表达情况;雷帕霉素处理离体培养Treg,流式分析其对Treg ICOS 表达作用。CFSE 标记人PBMC 细胞,并与离体培养Treg 混合培养,流式检测Treg 的接触抑制活性。结果:anti-CD3+anti-CD28磁珠刺激Treg 3 d,ICOS+ Treg 中活、死细胞的比例分别为(92.00依2.69)%和(2.20依0.56)%,在ICOS- Treg 中比例为(90.30±3.53)%和(1.77±0.78)%,两者无显著差异;培养第7 天,ICOS+ Treg 细胞比例从第3 天(40.20±1.83)% 降至(11.60±1.10)%;anti-CD3 +ICOSL-FC 刺激Treg 3 d 后,ICOS MFI 为(403.30依74.42),anti-CD3+anti-CD28 刺激组为(2 410.0±746.4),anti-CD3+ICOSL-FC 刺激后Treg ICOS 表达相比anti-CD3+anti-CD28 组显著下降;雷帕霉素处理离体培养Treg 细胞3 d 后,ICOS 表达下调。此外,雷帕霉素处理的离体培养Treg 均能有效抑制PBMC 中Tcon 的分裂增殖。结论:ICOS 表达高低对人外周血Treg 存活率影响无显著差异,mTOR 信号并非调控人Treg 离体培养ICOS 表达的唯一因素,CD28 协同信号对调控离体培养人Treg 。表达比ICOSL 信号更为重要,雷帕霉素处理的离体培养人Treg 仍具有细胞接触抑制活性。

Role of ICOS on in-vitro cultured human PBMC Treg