| 摘 要： | 目的探讨以重组质粒pc DNA3.1+-CD44(s1-s5)转染的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合培养后对乳腺癌干细胞(BCSC)的体外杀伤效应。方法传代培养乳腺癌细胞株MDA-MB-231,构建重组质粒p ET32aCD44(s1-s5)及pc DNA3.1+-CD44(s1-s5),前者转化感受态BL21后经原核系统表达,检测蛋白相对分子质量;后者通过化学转染法负载正常人外周血单个核细胞分离诱导的DC后,与同源诱导成熟的CIK细胞共同培养,以此为实验组[CD44(s1-s5)-DC-CIK组],并与对照组(载体质粒-DC-CIK组),即同样条件下以载体质粒pc DNA3.1+转染的DC与CIK共同培养,对体外微球体培养法富集的乳腺癌干细胞进行杀伤,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测各组的LDH释放值,计算细胞毒性百分比来对比两组效应细胞对靶细胞的杀伤效果。结果重组质粒构建成功,并能通过原核及真核系统正常表达;经过6 d的诱导培养,DC表面伸出大量突起,形态趋于成熟,CIK细胞始终呈单一圆球形悬浮生长,细胞数目较前明显增多。用LDH释放法检测在40∶1、20∶1、10∶1、5∶1 4种效靶比,在相同效靶比时,CD44(s1-s5)-DC-CIK组细胞杀伤活性(分别为33.45%±1.24%、25.43%±0.51%、16.07%±1.16%和9.40%±1.08%)明显高于载体质粒-DC-CIK组(分别为17.56%±0.71%、12.97%±0.36%、7.62%±0.25%和5.13%±0.21%),差异均有统计学意义(P0.05)。结论乳腺癌干细胞抗原负载的DC可以提高CIK细胞对抗原相关乳腺癌细胞的靶向杀伤活性,为临床生物靶向治疗的开展奠定了实验基础。
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