金纳米颗粒表面催化发夹组装无酶信号放大快速荧光法检测miRNA-721

目的 构建一种自催化发夹组装（CHA）无酶信号放大的靶标快速荧光法,用于检测靶标miRNA。方法 首先在金纳米颗粒（AuNPs）表面修饰5-羧基荧光素（FAM）标记的DNA发夹探针H1,H1的荧光被金纳米粒子猝灭。加入靶标miRNA会导致AuNPs上的H1标记荧光素远离AuNPs而发射荧光,随后H1和H2之间发生循环自组装,靶标循环被利用,导致荧光信号放大。将20 μL探针AuNPs-H1,50 μL 3 μmol/L探针 H2（退火缓冲液为20 mmol/L Tris-HCl,100 mmol/L NaCl,5 mmol/L MgCl2,pH 7.4）,与50 μL不同浓度的miRNA-721（0.1 ~ 5 μmol/L）在30℃下共反应20 min,最后在480 nm激发波长下测定体系的荧光强度。结果 以急性心肌炎生物标志物miRNA-721为模型靶标,在优化的实验条件下得到520 nm处的相对荧光强度变化值（?F = F – F0）与miRNA-721浓度呈良好的线性关系,拟合线性方程?F = 29232lgC – 52435（R2 = 0.9910）。该荧光法检测限为1.23 nmol/ L。在正常人血清中的加标回收率为92.71% ~ 104.02%。一次完整的miRNA分析可以在20 min内完成。结论 该方法可用于生物样品中miRNA-721的检测,为急性心肌炎的早期诊断提供了一种快速检测手段。