| 日本血吸虫消减雌性成虫cDNA文库的建立及其特异表达基因的筛选 |
| |
| 引用本文： | 王衍海,彭鸿娟,陈晓光,沈树满.日本血吸虫消减雌性成虫cDNA文库的建立及其特异表达基因的筛选[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2006,24(1):45-50. |
| |
| 作者姓名： | 王衍海 彭鸿娟 陈晓光 沈树满 |
| |
| 作者单位： | 南方医科大学寄生虫学教研室,广州,510515 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(ID:30200240)~~ |
| |
| 摘 要： | 目的 筛选雌性日本血吸虫特异表达基因。方法 感染日本血吸虫6周的家兔,用静脉灌注法收集成虫,经核糖核酸固定液固定,分别提取雌、雄成虫总RNA,纯化后获得mRNA,并反转录为cDNA。用抑制性消减杂交技术(SSH)构建雌、雄成虫正向消减(雌虫消减雄虫)及反向消减(雄虫消减雌虫)cDNA文库。用斑点杂交法筛选差异表达基因,挑选目标基因片段(与正向消减探针杂交的信号明显高于与反向消减探针杂交信号的克隆)进行测序、同源性搜索及基因功能预测分析。以日本血吸虫肌动蛋白(actin)基因作内参照,用半定量PCR(semi-quantitative PCR)鉴定目标基因在雌、雄虫体内的表达。结果 得到正向消减及反向消减cDNA文库,斑点杂交筛选出50个雌虫特异性表达的克隆,经测序得到42个表达序列标签(EST),其中,有17个基因(占40.5%)与已知日本血吸虫卵壳蛋白基因高度同源;17个基因(占40.5%)与日本血吸虫未知基因高度同源、且有一小片段与卵壳蛋白基因高度同源;有8个基因(占19.0%)与日本血吸虫其他未知基因高度同源。半定量PCR结果,6个基因在雌虫体内的表达水平明显高于雄虫,分别与GenBank的血吸虫卵壳蛋白基因AY222885、AY222895、AB017097、AF519182、M32281及血吸虫其他基因AY813556高度同源。结论 构建了雌、雄成虫正向消减及反向消减cDNA文库。用SSH可筛选日本血吸虫雌性特异性表达基因。
|
| 关 键 词： | 日本血吸虫 成虫 雌性特异性表达基因 抑制性消减杂交 卵壳蛋白 |
| 文章编号： | 1000-7423（2006）-01-0045-06 |
| 收稿时间： | 2005-05-30 |
| 修稿时间： | 2005年5月30日 |
Construction of the Female Subtractive cDNA Library and Screening of the Specific Expressing Genes |
| |
| WANG Yan-hai,PENG Hong-juan,CHEN Xiao-guang,SHEN Shu-man.Construction of the Female Subtractive cDNA Library and Screening of the Specific Expressing Genes[J].Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases,2006,24(1):45-50. |
| |
| Authors: | WANG Yan-hai PENG Hong-juan CHEN Xiao-guang SHEN Shu-man |
| |
| Institution: | Department of Parasitology, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Schistosoma japonicum Adult worms Female specific expressed gene Suppressive subtractive hybridization Egg-shell protein |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》下载免费的PDF全文 |
|
