过表达miR-21对人晶状体上皮细胞凋亡的调控作用

目的探讨过表达miR-21对人晶状体上皮细胞凋亡的调控作用。方法将miR-21过表达慢病毒载体及空载体慢病毒转染至人晶状体上皮细胞系——LEC B3细胞,并将实验分为Control组(未转染)、miR-21-NC组(转染空载体慢病毒)和miR-21组(转染miR-21过表达慢病毒载体)。荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白GFP的表达,RT-qPCR方法检测miR-21的表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光素酶报告基因分析验证miR-21与FasL的靶向关系,Western-blot检测细胞中凋亡相关蛋白FADD、caspase-3、Bcl-2及Bax的表达,试剂盒检测细胞线粒体膜电势的变化情况。结果在荧光显微镜下观察,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白细胞组未见绿色荧光。与Control组相比,miR-21组中miR-21的表达水平、Bcl-2表达水平和线粒体膜电位明显升高,而细胞凋亡率、FADD、caspase-3和Bax的表达水平均明显下降,差异均具有统计学意义(P0.05);miR-21-NC组与Control组相比差异无统计学意义(P0.05)。荧光素酶报告基因分析证实miR-21与FasL存在靶向关系。结论 miR-21可以抑制晶状体上皮细胞发生凋亡,既可通过靶向性调控外源性FasL/Fas通路参与caspase-3和FADD介导的细胞凋亡,也可通过线粒体途径对细胞凋亡发挥作用。