MiR-125a-5p靶向APC激活经典WNT信号通路促进hiPSCs分化为多巴胺能神经前体细胞 |
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引用本文: | 吴玉兰,蔡皓然,谢海航,苏中强,叶国生,梁宁,徐丽萍,龙大宏.MiR-125a-5p靶向APC激活经典WNT信号通路促进hiPSCs分化为多巴胺能神经前体细胞[J].解剖学研究,2020,42(1):4-14. |
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作者姓名: | 吴玉兰 蔡皓然 谢海航 苏中强 叶国生 梁宁 徐丽萍 龙大宏 |
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作者单位: | 广州医科大学基础医学院,广东广州511436;广州医科大学基础医学院,广东广州511436;广州医科大学基础医学院,广东广州511436;广州医科大学基础医学院,广东广州511436;广州医科大学基础医学院,广东广州511436;广州医科大学基础医学院,广东广州511436;广州医科大学基础医学院,广东广州511436;广州医科大学基础医学院,广东广州511436 |
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基金项目: | 国家自然科学基金;广东省自然科学基金 |
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摘 要: | 目的通过调节miR-125a-5p的表达实现人诱导性多能干细胞(hiPSCs)向多巴胺(DA)能神经前体细胞及DA能神经元的高效转化。方法应用MicroRNAs高通量测序与分析,miR-125a-5p的筛选、靶基因(APC)的预测与验证;miR-125a-5p前体miR-125a慢病毒载体的构建与包装,miR-125a-5p过表达hiPSCs细胞株的构建、筛选及其向多DA能神经前体细胞与DA能神经元的诱导分化;免疫细胞化学、实时定量PCR(qRT-PCR)及蛋白印迹(WB)法检测miR-125a-5p过表达hiPSCs与对照hiPSCs向DA能神经前体细胞及DA能神经元诱导分化过程中神经前体细胞标志物Nestin、底板细胞标志物Foxa2、DA能神经前体细胞标志物En1、DA能神经前体细胞分选标志物Corin、神经元标志物Tuj1及DA能神经元标志物TH的表达。结果 MiR-125a-5p在hiPSCs向DA能神经前体细胞及神经元诱导分化过程中的表达呈递增趋势,miR-125a-5p靶向调节经典WNT信号通路关键因子APC,稳定过表达miR-125a-5p的hiPSCs细胞株能向DA能神经前体细胞及DA能神经元分化,其诱导分化效率与对照hiPSCs相比在神经前体细胞(NPCs)阶段FOXA2、EN1、CORIN的表达明显增高,神经元阶段TH、DAT和Nurr1的表达明显增高,提示过表达miR-125a-5p的hiPSCs具有更好的向DA能神经前体细胞及DA能神经元的诱导分化潜能。结论 MiR-125a-5p能通过靶向下调APC的表达激活经典WNT信号通路活性,促进hiPSCs向DA能神经前体细胞及DA能神经元的诱导分化。
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关 键 词: | 人诱导性多能干细胞 经典WNT信号通路 MiR-125a-5p 腺瘤型结肠息肉 多巴胺能神经前体细胞 |
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