| SARI基因真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 郑德柱.SARI基因真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的建立[J].福建医药杂志,2015,37(2):76-80. |
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| 作者姓名： | 郑德柱 |
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| 作者单位： | 南京军区福州总医院临床遗传与实验医学科 福州350025 |
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| 摘 要： | 目的构建人SARI基因真核表达载体,并建立稳定转染的HeLa细胞系。方法采用RT-PCR技术从正常人外周血单个核细胞cDNA文库中扩增SARI基因序列,连接插入至pCMV-N-Flag真核表达载体,并对重组质粒进行酶切及测序鉴定;阳离子聚合物介导重组质粒转染HeLa细胞后,用G418抗生素筛选稳定转染的细胞系。间接免疫荧光检测Flag-SARI融合蛋白在HeLa细胞系中的表达定位。RT-PCR及Western blot检测SARI mRNA及蛋白的表达变化。结果双酶切和DNA测序表明pCMV-Flag-SARI真核表达质粒构建成功。经G418筛选后,RT-PCR和Western blot表明,转染重组质粒的HeLa细胞系中SARI mRNA及蛋白的表达明显升高。间接免疫荧光结果显示,Flag-SARI融合蛋白在HeLa细胞系的胞质和胞核中均有表达,且胞质荧光信号强于胞核。结论成功构建pCMV-Flag-SARI真核表达载体,表达的FlagSARI蛋白主要定位于HeLa细胞系的胞质中。
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| 关 键 词： | SARI 真核表达 HeLa细胞 细胞定位 |
Construction of the eukaryotic expression vector of SARI gene and establishment of transfected HeLa cell line stably expressing SARI |
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| ZHENG Dezhu.Construction of the eukaryotic expression vector of SARI gene and establishment of transfected HeLa cell line stably expressing SARI[J].Fujian Medical Journal,2015,37(2):76-80. |
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| Authors: | ZHENG Dezhu |
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| Institution: | ZHENG Dezhu;Department of Clinical Genetics and Experimental Medicine,Fuzhou General Hospital; |
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