| 人骨形态发生蛋白12基因重组腺病毒载体的构建 |
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| 引用本文： | 马勇,张辛,敖英芳. 人骨形态发生蛋白12基因重组腺病毒载体的构建[J]. 中国运动医学杂志, 2008, 27(2): 198-201 |
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| 作者姓名： | 马勇 张辛 敖英芳 |
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| 作者单位： | 北京大学第三医院运动医学研究所,北京,100083 |
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| 摘 要： | 目的:构建及制备人骨形态发生蛋白12(BMP12)基因重组腺病毒,证明其可感染脂肪组织来源干细胞并表达蛋白。方法:将包含有BMP12cDNA全长序列的BMP12-pED6质粒用限制性内切酶EcoRI进行酶切,得到一个1260bp大小的含有BMP12cDNA的目的基因片段。将目的基因片段插入质粒pcDNA3.1后,用KpnI和PmeI进行双酶切,插入pAdtrack-CMV。插入目的基因片段的穿梭质粒pAdtrack-CMV-BMP12用PmeI进行酶切线性化后与腺病毒骨架载体pAdEasy-1一起电转化入感受态BJ5183菌株。用PCR及多种酶切方法鉴定重组体。最终将线性化的重组质粒利用脂质体转入293A细胞中进行病毒包装。BMP12基因随着重组腺病毒在感染的293A细胞中扩增而得到复制,并通过CsCl梯度离心法得以纯化。Elisa法检测Ad-BMP12感染脂肪组织来源干细胞后BMP12的蛋白表达。结果:pAdtrack-CMV-BMP12经酶切证实有1260bp的插入片段。酶切及PCR鉴定证实BMP12基因重组腺病毒载体构建成功。GFP(green fluorescent protein)表明重组腺病毒扩增成功并制备出高滴度重组病毒。该重组病毒可成功感染脂肪来源组织干细胞并表达BMP12蛋白。结论:BMP12基因能够重组于腺病毒载体,可以进行有效扩增,产生高浓度的重组腺病毒,从而用于BMP12基因治疗的研究。
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| 关 键 词： | 腺病毒 骨形态发生蛋白12 基因治疗 |
| 修稿时间： | 2007-10-07 |
Construction of Recombinant Adenovirus Vector Carrying the Human Bone Morphogenetic Protein 12 Gene |
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| Ma Yong,Zhang Xin,Ao Yingfang. Construction of Recombinant Adenovirus Vector Carrying the Human Bone Morphogenetic Protein 12 Gene[J]. Chinese Journal of Sports Medicine, 2008, 27(2): 198-201 |
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| Authors: | Ma Yong Zhang Xin Ao Yingfang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | adenovirus bone morphogenetic protein 12 gene therapy |
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