一种肺血管基因敲减动物模型的构建及在肺动脉高压中的运用

目的 探讨经大鼠的气道注入1型腺相关病毒（AAV1）携带的KLF4-shRNA能否有效构建肺血管基因敲减动物模型以及其在肺动脉高压中的运用。方法 根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,并以细胞计数和细胞迁移实验加以验证,然后进一步构建AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体。将44只清洁级SD大鼠随机分为4组：健康对照组、盐水模型组、对照病毒载体组、基因敲减组。后3组大鼠分别气管内注入生理盐水（盐水模型组）、AAV1-control vector（对照病毒载体组）、AAV1-KLF4-shRNA（基因敲减组）。1个月后对后3组进行烟熏造模,烟熏4个月后麻醉各组大鼠,分别检测右心室收缩压和平均右心室压,并取肺组织以免疫荧光法观察病毒载体在肺血管中的表达情况,通过PCR方法测定肺动脉中KLF4水平,通过HE染色比较肺小血管中膜厚度评估肺血管肥厚程度。取大鼠心脏计算右心肥厚指数。结果 细胞计数和细胞迁移实验证实选用的KLF4-siRNA链有效。免疫荧光实验显示,经大鼠气道注入的1型腺相关病毒载体均沿肺血管分布。荧光定量PCR实验显示,基因敲减（AAV1-KLF4-...