| 人胰腺核糖核酸酶的基因克隆、蛋白表达与活性测定 |
| |
| 引用本文： | 吕勇刚,史明,王廷,李南林,允军,凌瑞,王岭.人胰腺核糖核酸酶的基因克隆、蛋白表达与活性测定[J].现代肿瘤医学,2010,18(7). |
| |
| 作者姓名： | 吕勇刚 史明 王廷 李南林 允军 凌瑞 王岭 |
| |
| 作者单位： | 1. 第四军医大学西京医院血管内分泌外科,陕西,西安,710032
2. 第四军医大学西京医院神经内科,陕西,西安,710032 |
| |
| 基金项目： | 陕西省科技计划项目，西安市社会发展计划项目 |
| |
| 摘 要： | 目的:构建人胰腺核糖核酸酶(hpRNase)原核表达载体、获得纯化hpRNase蛋白,为构建乳腺癌单链免疫毒素奠定基础.方法:针对编码hpRNase成熟蛋白基因的cDNA序列设计相应的引物,通过反转录PCR技术,从一例胰腺切除患者的组织标本中,扩增出编码hpRNase成熟蛋白的cDNA序列,亚克隆入表达载体pPROEX-HTb;在大肠杆菌B121中经IPTG诱导融合蛋白表达,并用镍离子交换树脂进行蛋白纯化;通过RNA水解实验验证hpRNase重组蛋白的活性.结果:经PCR、酶切、测序等方法鉴定,hpRNase cDNA正确克隆入pPROEX-HTb表达载体;IPTG可诱导载体表达分子量约20 kD的蛋白产物,经Western blot验证可与抗hpRNase抗体发生特异性反应;经镍离子交换树脂纯化后的重组蛋白可有效降解RNA.结论:成功构建hpR-Nase原核表达载体,并获得有RNA降解活性的hpRNase重组蛋白,为进一步构建乳腺癌单链免疫毒素奠定了基础.
|
| 关 键 词： | 人胰腺核糖核酸酶 免疫毒素 乳腺癌 |
Construction of prokaryotic expression plasmid with human pancreatic ribonuclease gene and protein expression and identification |
| |
| LV Yong-gang,SHI Ming,WANG Ting,LI Nan-lin,YUN Jun,LING Rui,WANG Ling.Construction of prokaryotic expression plasmid with human pancreatic ribonuclease gene and protein expression and identification[J].Journal of Modern Oncology,2010,18(7). |
| |
| Authors: | LV Yong-gang SHI Ming WANG Ting LI Nan-lin YUN Jun LING Rui WANG Ling |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | PCR cDNA |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
