幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因Urel的真核载体构建、表达及抗原性研究

目的构建含人幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H．pylori）尿素通道蛋白编码基因（UreI）的真核表达的重组载体，并在COS-7细胞中表达，为核酸疫苗的开发奠定基础。方法以原核表达质粒pET32a（＋）／UreI为模板，扩增UreI编码基因片段，将目的基因与同样进行酶切、纯化的载体pEGFPN1进行连接，而后转化并筛选含有目的基因的重组载体pEG—FP—N1／UreI，并在COS-7细胞中表达，以荧光蛋白和Westernblot法检测其表达产物。结果经酶切、测序证实插入的基因片段为H．pyloriUreI蛋白编码基因；荧光显微镜下和Westernblot法等检测显示，该重组质粒能够在COS-7细胞中表达目的蛋白，同时能够被H．pylori阳性患者血清所识别。结论成功地构建了真核重组载体pEGFP—N1／UreI，并在COS-7细胞中表达。