聚乙醇酸生物支架与胰岛的共培养

背景：以往的研究表明，胰岛细胞体外培养的时间不宜过长，否则会出现纤维组织过度增生，使胰岛大量死亡，而导致移植失败，所以改善胰岛细胞体外培养环境是非常重要的。 目的：将大鼠胰岛种植在聚乙醇酸生物支架上，并进行胰岛与支架共培养，观察支架上胰岛细胞的生长状态、胰岛细胞的形态和胰岛细胞的分泌功能，以寻找胰岛细胞体外生存的良好环境。 设计、时间及地点：体外培养，对比观察实验，于2005-06/2008-12在哈尔滨医科大学附属第一医院，卫生部细胞移植重点实验室完成。 材料：聚乙醇酸支架纤维直径15 μm，网孔100~150 μm，空隙率为97%，厚度为1.0~2.0 mm。细胞培养前将支架浸泡入体积分数为75%乙醇溶液中30 min，PBS冲洗3次，吹干后放入2 g/L多聚赖氨酸中浸泡30 min，消毒后备用。 方法：采用胶原酶Ⅴ分离和消化大鼠胰岛，对照组胰岛加入含体积分数20%胎牛血清、10 g/L青霉素-链霉素-两性霉素、10 mmol/L Hepes的RPMI-1640培养液；支架组胰岛放在多聚赖氨酸包被的聚乙醇酸支架上，再加入同样的培养基，每个培养皿中细胞浓度为0.6×103，将两组细胞置于体积分数5%CO2、37 ℃的恒温培养箱中培养。 主要观察指标：应用双硫腙胰岛特异性染色，计算胰岛的数量及检测胰岛的纯度；MTT法检测胰岛的成活率；放射免疫法测定胰岛细胞培养上清液中的胰岛素含量；并用扫描电镜对支架上胰岛的黏附生长进行观察。 结果：分离和消化后的胰岛被双硫腙染成红色，胰岛外分泌腺不着色，胰岛纯度≥85%；MTT及胰岛功能检测结果显示，支架组的胰岛成活率及胰岛功能明显增高，与对照组相比差异有显著性意义(P < 0.05)；扫描电镜观察，胰岛紧密黏附在聚乙醇酸支架上，支架上胰岛成三维立体生长。 结论：聚乙醇酸支架与大鼠胰岛共培养可改善胰岛的成活率、胰岛的功能及形态，并使胰岛体外生存期延长。

Culture of islets on a polyglycolic acid scaffold