| 小鼠SKA1蛋白的多克隆抗体制备、鉴定与初步应用 |
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| 引用本文： | 姜飞,刘小林,李喜莲,Jim W Xuan.小鼠SKA1蛋白的多克隆抗体制备、鉴定与初步应用[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(3). |
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| 作者姓名： | 姜飞 刘小林 李喜莲 Jim W Xuan |
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| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100
2. 加拿大西安大略大学生理与药学系, 安大略 加拿大 N6A5C1 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，加拿大卫生研究院基金 |
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| 摘 要： | 目的:制备兔抗鼠SKA1(Spindle and Kinetochore Associated 1)多克隆抗体.方法:利用PCR的方法得到小鼠SKA1基因并克隆至pGEX-2T 原核表达载体中,转化入大肠杆菌BL21表达,经IPTG 诱导表达GST-SKA1融合蛋白,经亲和层析纯化浓缩后免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,通过ELISA测定抗鼠SKA1多克隆抗体效价,用Western blot测定其特异性.结果:构建了pGEX-2T-SKA1原核表达重组质粒,并诱导表达出GST-SKA1融合蛋白,免疫新西兰大耳白兔5周后获得多克隆抗体.ELISA测定表明SKA1多克隆抗体效价为1:25 600,Western blot分析表明SKA1多克隆抗体具有良好的特异性.通过免疫组织化学方法发现,SKA1表达于高分化前列腺癌细胞中.结论:成功地制备了效价及特异性良好的兔抗鼠SKA1多克隆抗体,为SKA1基因功能的研究奠定基础.
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| 关 键 词： | SKA1基因 纺锤体检测点 多克隆抗体 肿瘤 小鼠 |
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