| 人CD133基因转染细胞株的建立及其生物学功能的初步研究 |
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| 引用本文： | 汪家敏,陈永井,张光波,李芳,胡玉敏,张学光.人CD133基因转染细胞株的建立及其生物学功能的初步研究[J].细胞与分子免疫学杂志,2010,26(1). |
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| 作者姓名： | 汪家敏 陈永井 张光波 李芳 胡玉敏 张学光 |
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| 作者单位： | 1. 苏州大学生物技术研究所,江苏,苏州,215007;苏州大学医学部生物化学与分子生物学系,江苏,苏州,215007
2. 苏州大学生物技术研究所,江苏,苏州,215007;苏州大学江苏省干细胞重点实验室,江苏,苏州,215007 |
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| 基金项目： | 国防科工委基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建人干细胞标记分子CD133-2转基因细胞并探讨CD133-2分子的生物学功能。方法:利用分段克隆和重叠PCR方法从人胎肝cDNA文库中克隆出人CD133-2全长基因,经双酶切后装入真核表达载体p IRES2-EGFP中,用脂质体法转染L929细胞,加入G418选择性培养基进行筛选。经RT-PCR、Western blot、流式细胞术(FCM)等方法鉴定转基因细胞;MTT法分析转基因细胞对T细胞的体外增殖作用;流式细胞仪分析T细胞表面活化分子标记CD4CD25、CD8CD25的表达。结果:成功克隆和构建了能稳定表达人CD133-2分子的转基因细胞CD133-2/L929,该转基因细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖,下调T细胞表面分子CD4CD25和CD8CD25的表达。结论:稳定表达CD133-2蛋白的转基因细胞株的建立为该基因功能的后续研究奠定了物质基础。
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| 关 键 词： | 基因转染 肿瘤干细胞 T细胞 |
Generation and preliminary functional study of a CD133-2-harboring L929 cell line |
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| WANG Jia-min,CHEN Yong-jing,ZHANG Guang-bo,LI Fang,HU Yu-min,ZHANG Xue-guang, Biotechnology Institute,Biochemistry , Molecular Biology.Generation and preliminary functional study of a CD133-2-harboring L929 cell line[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2010,26(1). |
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| Authors: | WANG Jia-min CHEN Yong-jing ZHANG Guang-bo LI Fang HU Yu-min ZHANG Xue-guang Biotechnology Institute Biochemistry Molecular Biology |
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| Institution: | WANG Jia-min1,2,CHEN Yong-jing1,3,ZHANG Guang-bo1,LI Fang1,HU Yu-min1,ZHANG Xue-guang1,3 1Biotechnology Institute,2Biochemistry , Molecular Biology Department of Medical College of Soochow University,3Jiangsu Province Key Laboratory of Stem Cell,Soochow University,Suzhou 215007,China |
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| Abstract: | AIM:To generate an engineered L929 cell line harboring human CD133-2 and perform the functional study of the gene-modified cell line.METHODS:The human CD133-2 gene was obtained by PCR from a cDNA library of foetus liver.After digested with Hind III and BamH I,the PCR product was cloned into pIRES2-EGFP vector.The recombinant plasmid CD133-2/pIRES2-EGFP was transfected into L929 cell line using lipofectamine,followed by G418 selection.RT-PCR,Western blot and flow cytometry(FCM)were used to detect the express... |
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| Keywords: | CD133 CD133 transfection tumor stem cell T cell |
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