温胆汤含药血清对谷氨酸条件下原代星形胶质细胞P38MAPK及PKC的影响

目的:探讨温胆汤含药血清在谷氨酸(Glu)环境条件下对星形胶质细胞P38MAPK和PKC表达的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20mg/kg组、温胆汤40g/kg组、温胆汤30g/kg组、温胆汤20g/kg组,每组8只。正常组用等量生理盐水ig,氯氮平组ig 20 mg/kg,ig温胆汤生药40、30、20 g/kg,1次/d,8天后处死取血,制备含药血清。胶质原纤维酸性蛋白免疫染色法鉴定培养的星形胶质细胞纯度。星形胶质细胞在谷氨酸(0、5、10μmol/ml)条件下经含药血清处理,即谷氨酸对照组、正常血清组、氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg血清组,处理24h、36h和48h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;ELISA法检测P38MAPK磷酸化和非磷酸化及PKC蛋白表达的影响。结果:培养的星形胶质细胞纯度在95%以上。谷氨酸(0μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg、30g/kg含药血清组在3个时间段不同程度增加星形胶质细胞存活率;谷氨酸(5、10μmol/ml)条件下,温胆汤含药血清处理24h、36h后,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg含药血清组不同程度增加的细胞存活率;48h后,温胆汤40g/kg含药血清组增加的细胞存活率。谷氨酸(0、5、10μmol/ml)条件下,氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤30g/kg含药血清组能显著上调星形胶质细胞P38MAPK蛋白磷酸化和非磷酸化的表达。谷氨酸(0、5μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg含药血清组显著降低星形胶质细胞PKC表达;谷氨酸(10μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg含药血清组显著降低星形胶质细胞PKC表达。结论:一定谷氨酸环境下温胆汤能不同程度的增加星形胶质细胞的存活率,能上调P38MAPK磷酸化和非磷酸化的表达及降低PKC蛋白的表达,从而间接反映出温胆汤能调节星形胶质细胞GJIC(细胞缝隙连接)的功能。

Effect of Wendan decoction medicated serum on P38MAPK and PKC in primary astrocytes under glutamate condition