甘氨鹅去氧胆酸对大鼠肝窦内皮细胞凋亡的影响

背景：肝窦内皮细胞（SEC）凋亡是肝脏疾病发生、发展的重要因素之一。在胆汁淤积症中，疏水性胆汁酸甘氨鹅去氧胆酸（GCDC）直接诱发肝细胞凋亡，而亲水性胆汁酸熊去氧胆酸（UDCA）能防止诱发肝细胞凋亡。目的：研究GCDC引起原代培养大鼠SEC损害和凋亡、UDCA对GCDC诱导凋亡的抑制作用以及涉及caspase-8的作用机制。方法：采用胶原酶A原位灌注和Pevcoll分离液（25％和50％）梯度离心法分离Wistar大鼠SEC，SEC于添加了EGM-2因子的EBM-2培养基中培养（5％CO2，37℃）3d，然后在含有GCDC和（或）UDCA的新鲜培养液中继续培养4h。以原位末端标记（TUNEL）技术检测SEC凋亡情况。以FLICE／caspase-8比色蛋向酶检测试剂盒测定caspase-8的表达情况。结果：相差显微镜下，培养3d时的SEC星纺锤状并基本融合。而在与GCDC孵育的过程中SEC趋于皱缩，孵育4h时最终从培养皿脱落。SEC与不同浓度的GCDC（50—250μmol／L）孵育1h后，TUNEL染色阳性的细胞数量开始增加，4h后儿乎所有细胞呈TUNEL染色阳性（P〈0．05）；对照组SEC仅少数呈TUNEL染色阳性。在原代培养SEC与终浓度100μmol／L GCDC培养液中加入UDCA（50～200μmol／L）可明显减少TUNEL染色阳性的SEC，且抑制作用呈剂量依赖性（P〈0．05）；200μmol／LUDCA存在时．GCDC引起SEC凋亡的水平是GCDC单独孵育4h时的20％。SEC与250μmol／LGCDC孵育2h，SEC中caspase-8表达明显增加．而加入200μmol／LUDCA则几乎可完全阻止caspase-8表达增加。结论：UDCA能阻止GCDC诱发的原代培养SEC凋亡，此作用至少部分是通过抑制GCDC上调SEC中caspase-8的表达而实现的。

Effects of Glycochenodeoxycholic Acid on Apoptosis of Rat Sinusoidal Endothelial Cells