人心房肌KChIP2基因表达质粒pEGFP-KChIP2 |
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引用本文: | 谭晓秋,曾晓荣,白志茹,杨艳,刘智飞,陈桂兰,裴杰. 人心房肌KChIP2基因表达质粒pEGFP-KChIP2[J]. 泸州医学院学报, 2009, 32(3): 209-213 |
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作者姓名: | 谭晓秋 曾晓荣 白志茹 杨艳 刘智飞 陈桂兰 裴杰 |
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作者单位: | 泸州医学院心肌电生理学研究室,四川泸州,646000 |
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基金项目: | 教育部重点资助项目,四川省教育厅重点项目 |
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摘 要: | 目的:KChIPs作为瞬时外向钾通道(Ito)最重要的辅助亚基,在调控通道基因表达和电流特性中起重要作用。本实验拟构建人心房肌KChIP2基因表达质粒,为研究KChIP2对Ito的调控功能奠定基础。方法:①提取人心房肌总RNA,逆转录得到cDNA;②通过特异性引物进行PCR扩增得到KChIP2编码区全长序列,亚克隆到pMD18-T载体中.得到重组克隆质粒pMD18-T—KChIP2;③再设计带有酶切位点HindⅢ和BamH Ⅰ的特异性引物,对重组克隆质粒pMD18-T—KChIP2进行PCR扩增,得到含有酶切位点的KChIP2编码区全长序列;④对含有酶切位点的KChIP2全长片段和pEGFP—c1进行HindⅢ和BamH Ⅰ双酶切反应,然后进行电泳后胶回收,再进行连接和转化反应;⑤提取质粒,测序鉴定。结果:质粒测序结果与PubMed数据库KchIP2(AY026328)序列比对,同源性为99%。结论:成功构建人心房肌KChIP2基因表达质粒,为下一步转染实验研究KChIP2对瞬时外向钾通道的功能调控奠定了基础。
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关 键 词: | 瞬时外向钾通道 心肌细胞 钾通道相关蛋白2 基因克隆 |
CONSTRUCTION AND IDENTIFICATION OF EXPRESSION PLASMID PEGFP-KCHIP2 OF THE HUMAN ATRIAL MYOCYTES KCHIP2 GENE |
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Affiliation: | Tan Xiaoqiu, et al( Institute of Myocardium Electrophysiology, Luzhou Medical College) |
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Abstract: | |
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Keywords: | Transient outside potassium channel Cardiac myocytes Kv channel-interacting proteins 2 Gene clone |
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