| 抑肽酶基因的克隆和表达 |
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| 引用本文： | 高捷,谭树华,吴梧桐. 抑肽酶基因的克隆和表达[J]. 药物生物技术, 2002, 9(2): 66-70 |
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| 作者姓名： | 高捷 谭树华 吴梧桐 |
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| 作者单位： | 中国药科大学生物制药学院,南京,210009 |
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| 摘 要： | 抑肽酶作为天然的非特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂，临床用途广泛。为实现抑肽酶的大量制备，按大肠杆菌惯用密码子用人工方法合成抑肽酶结构基因，克隆于PUC18的EcoRⅠ和PstⅠ位点，转入Top10大肠杆菌（recA)中，经测序证明序列正确，表达体系模拟抑肽酶的体内成熟过程，将其自身的13肽pro序列融合于抑肽酶的N端，并在其间插入胰蛋白酶识别位点，该融合蛋白在使用PET-11C载体表达时，产物以包涵体形式存在于大肠杆菌中，表达量占菌体总蛋白的30%以上，复性实验证明：该肽段不影响抑肽酶的正确折叠，还能帮助抑肽酶包涵体进行体外折叠。提高复性得率，复性后使用胰蛋白酶切割融合蛋白，可得天然构象的活性抑肽酶。
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| 关 键 词： | 抑肽酶 克隆 融合表达 复性 基因表达 非特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂 |
| 文章编号： | 1005-8915(2002)02-066-05 |
| 修稿时间： | 2001-11-12 |
Cloning and Expression Recombinant Bovine-Pancreatic-Trypsin-Inhibitor in E. coli |
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