HIV-1整合酶142-288氨基酸蛋白的表达、纯化及抗原性鉴定

目的 构建人类免疫缺陷病毒I型（HIV-1）整合酶（IN）142—288氨基酸蛋白的原核表达系统．对其进行表达、纯化及抗原性评价。方法 采用PCR方法以野生型HIV-1IN表达质粒为模板扩增IN142-288氨基酸cDNA片段。BamH I与Xho I双酶切消化后连接到表达载体pGEX-4T1中，构建pGEX-4T1-IN142—288质粒，并进行双酶切与测序鉴定。将该质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3），经异丙基-β—D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。表达产物经液相层析纯化。将纯化后的IN142-288蛋白免疫BALB／c小鼠，对其抗原性进行评价。结果 pGEX-4T1-IN142—288质粒经过双酶切后可见清晰的载体条带和438bp插入的外源基因片段。SDS-PAGE和Western-blot方法对纯化的分析。可见一约40kDa的蛋白条带。ELISA法检测免疫小鼠的抗血清。结果显示3只小鼠均产生了较高滴度的抗体；Western-blot结果显示1号小鼠抗血清可以识别变性转移至NC膜上的野生型HIV-1IN。结论 成功构建了pGEX-4T1-IN142—288质粒。在原核表达系统中表达的IN142-288多肽抗原具有良好的抗原性。

Prokaryotic expression,purification and antigenic evaluation of HIV-1 integrase 142-288 site amino acid protcin