长链非编码RNA CAF调节阿霉素诱导的心肌细胞毒性机制的研究

目的阿霉素（doxorubicin，DOX）作为化疗药物广泛用于治疗各种肿瘤。然而，限制其临床应用的主要因素是心脏毒性，调节DOX诱导的心脏毒性的分子组分和详细机制仍然在很大程度上不明。本研究旨在探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)调节DOX诱导的心肌细胞毒性机制。方法采用高通量lncRNAs基因芯片研究与对照组样品相比较，2 μmol/L DOX诱导的细胞样品中的lncRNA的差异性表达谱。同时采用实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）方法对差异表达的lncRNA分子进行验证。6只健康纯种雄性8周龄小鼠，通过DOX注射制作心脏毒性模型小鼠（模型组）；6只健康C57BL/6J小鼠饲以基础饲料为对照组；小鼠原代心肌细胞根据转染情况分为阴性对照组,心肌细胞凋亡因子（cardiac apoptosis factor，CAF）组和CAF siRNA组。通过荧光定量PCR测定模型组与对照组小鼠MIEF1基因的表达。通过合成lncRNA的小干扰RNA作为反向对照抑制MIEF1在小鼠原代心肌细胞中的表达，应用实时荧光定量PCR验证MIEF1表达情况。结果①对lncRNA基因芯片结果进行差异性分析，实时定量PCR检测结果显示，与正常组相比较，DOX处理组中被命名为CAF的lncRNA表达显著上调（n=4;t=7.79，P<0.01）。②DOX诱导的小鼠心肌细胞毒性模型造模成功。荧光定量PCR显示,与空白对照组相比，模型组MIEF1 mRNA的表达量明显降低（n=3;t=14.978，P<0.01）；不同浓度DOX处理细胞24 h 后，DOX浓度越高，MIEF1 mRNA的表达量显著降低（n=4;t2 μmol/L=33.423,P<0.01；t4 μmol/L=36.120,P<0.01；t6 μmol/L=40.205,P<0.01）。CAF siRNA组MIEF1下调（n=4;t=12.909,P<0.01），CAF组上调（n=4;t=33.634,P<0.01）。③蛋白印迹法显示CAF组MIEF1蛋白表达水平明显低于阴性对照组（n=4;P<0.01）,然而CAF siRNA组MIEF1蛋白表达水平高于阴性对照组（n=4;t=4.892，P<0.01）。结论LncRNA CAF在心脏细胞和小鼠的心脏响应DOX的治疗下调。用DOX治疗后MIEF1的表达水平显著降低。LncRNA CAF直接靶向 51 kDa的MIEF1，并抑制其在转录水平的表达。本研究确定了一种由lncRNA CAF和MIEF1组成的新途径，其介导DOX心脏毒性，为治疗心脏保护提供了有希望的治疗策略。

Effect of the long non coding RNA CAF on Doxorubicin induced cardiotoxicity and its possible mechanisms