pPICZα-LL37-Fcγ1重组质粒的构建及其在毕赤酵母GS115中的表达 |
| |
引用本文: | 彭智,安云庆.pPICZα-LL37-Fcγ1重组质粒的构建及其在毕赤酵母GS115中的表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2007,23(10):969-972. |
| |
作者姓名: | 彭智 安云庆 |
| |
作者单位: | 首都医科大学免疫学系,北京,100069 |
| |
基金项目: | 北京市自然科学基金;北京市教委科技发展计划 |
| |
摘 要: | 目的:构建pPICZα-LL37-Fcγ1重组表达载体,实现LL37-Fcγ1重组融合蛋白在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达,获得功能性抗菌蛋白。方法:通过合成LL37全基因,将其与人IgG1Fc(Fcγ1)基因相连后,插入到毕赤酵母菌表达载体pPICZα中。电转化毕赤酵母菌GS115后,经Zeocin抗性筛选阳性菌株。用RT-PCR和斑点杂交鉴定目的基因的表达。通过亲和层析法纯化目的蛋白,并以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。用BCA法测定目的蛋白的浓度,鲎试剂鉴定其中和内毒素的能力。结果:成功地构建了pPICZα-LL37-Fcγ1重组质粒,并证明目的基因已整合于毕赤酵母菌的基因组中。通过亲和层析获得具有结合蛋白A及中和内毒素能力的重组融合蛋白LL37-Fcγ1。结论:在毕赤酵母菌GS115中高效表达功能性的LL37-Fcγ1融合蛋白,为进一步研究奠定了基础。
|
关 键 词: | 巴斯德毕赤酵母 分泌表达 |
文章编号: | 1007-8738(2007)10-0969-04 |
修稿时间: | 2006-09-18 |
本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录! |
|