| 稳定表达人胰岛素原突变基因的HepG2细胞构建及其胰岛素分泌 |
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| 引用本文： | 郑宏庭,邓华聪,兰丽珍,方芳,刘金波,李丙蓉,蹇锐.稳定表达人胰岛素原突变基因的HepG2细胞构建及其胰岛素分泌[J].第三军医大学学报,2007,29(24):2361-2363. |
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| 作者姓名： | 郑宏庭 邓华聪 兰丽珍 方芳 刘金波 李丙蓉 蹇锐 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学附属第一医院内分泌科,重庆,400016;第三军医大学,新桥医院内分泌科,重庆,400037;重庆医科大学附属第一医院内分泌科,重庆,400016;第三军医大学,新桥医院内分泌科,重庆,400037;第三军医大学,基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的 构建稳定表达人胰岛素原突变(mutated human proinsulin,mhPINS)基因的HepG2细胞,将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"(artificial beta cell).方法 重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317,经G418筛选,NIH3T3细胞测定病毒滴度,获取高滴度的稳定产毒细胞克隆,以PCR进行鉴定.以mhPINS病毒感染HepG2细胞,经G418筛选,对HepG2/mhPINS细胞进行RT-PCR、Western blot、放免法鉴定,并行葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测.结果 所获HepG2/mhPINS细胞生长良好,RT-PCR获得286 bp目的条带,Western blot检测可见34×103的特异性条带,放免法在其培养上清中检测到胰岛素与C肽,而HepG2/pLXSN细胞上述各项检测均为阴性.葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测显示,HepG2/mhPINS细胞在不同葡萄糖浓度(0.1、10、20 mmol/L)条件下引起的胰岛素分泌无显著性差异(P＞0.05).结论 成功构建稳定表达mhPINS基因的HepG2细胞,其内获得成熟胰岛素的表达与分泌,但其胰岛素分泌对葡萄糖刺激缺乏反应.
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| 关 键 词： | mhPINS基因 逆转录病毒 HepG2细胞 胰岛素 |
| 文章编号： | 1000-5404(2007)24-2361-03 |
| 修稿时间： | 2007年6月25日 |
Construction and insulin secretion of HepG2 cell stably expressing mutated human proinsulin gene |
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| ZHENG Hong-ting,DENG Hua-cong,LAN Li-zhen,FANG Fang,LIU Jin-bo,LI Bing-rong,JIAN Rui.Construction and insulin secretion of HepG2 cell stably expressing mutated human proinsulin gene[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2007,29(24):2361-2363. |
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| Authors: | ZHENG Hong-ting DENG Hua-cong LAN Li-zhen FANG Fang LIU Jin-bo LI Bing-rong JIAN Rui |
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